ФС.2.1.0331. Эфавиренз
утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377
Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
| Эфавиренз | ФС.2.1.0331 |
| Эфавиренз | |
| Efavirenzum | Вводится впервые |
|
|
|
| C14H9ClF3NO2 |
М.м. 315,67 |
| [154598-52-4] |
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(4S)-4-(Трифторметил)-6-хлор-4-(циклопропилэтинил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он.
Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % эфавиренза C14H9ClF3NO2 в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или почти белый порошок.
*Проявляет полиморфизм.
Растворимость. Легко растворим в метаноле и дихлорметане, практически не растворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр предварительно высушенной при 105 °С в течение 30 мин и охлаждённой в эксикаторе субстанции в области от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца эфавиренза.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика эфавиренза на хроматограмме раствора стандартного образца эфавиренза (раздел «Количественное определение»).
ИСПЫТАНИЯ
Температура плавления. От 136 до 142 °C (ОФС «Температура плавления»).
Удельное вращение. От –89 до –100 в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество
(ОФС «Оптическое вращение»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 30 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Энантиомерная чистота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза (ПФ). Этанол—гексан 30:970.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца эфавиренза рацемического, растворяют в ПФ и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.
Примечание
(R)-Энантиомерэфавиренза: (4R)-4-(трифторметил)-6-хлор-4-(циклопропилэтинил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он [154801-74-8].
Хроматографические условия
| Колонка 1 | 250 × 4,6 см, силикагель, модифицированный трис-3,5-диметифенилкарбаматом целлюлозы, 10 мкм; |
| Колонка 2 (соединена последовательно с колонкой 1) | 250 × 4,6 см, силикагель нитрильный для хроматографии (1), 5 мкм; |
| Температура колонки | 35 °С; |
| Скорость потока | 1,0 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 250 нм; |
| Объём пробы | 20 мкл; |
| Время хроматографирования | 30 мин. |
Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. (S)-Энантиомер эфавиренза – 1; (R)-энантиомер эфавиренза – около 0,88.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками (R)-энантиомера эфавиренза и
(S)- энантиомера эфавиренза должно быть не менее 3,0.
Содержание (R)-энантиомера эфавиренза в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования.
Допустимое содержание примесей. (R)-Энантиомер эфавиренза – не более 0,5 %.
Родственные примеси
Метод 1. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы защищают от действия света и используют свежеприготовленными. Используют только свежеоткрытую трифторуксусную кислоту со сроком хранения не более 6 мес. Для приготовления и хранения растворов, содержащих эфавиренз и его примеси, используют посуду из полипропилена.
Подвижная фаза А (ПФА). Трифтоуксусная кислота—метанол—вода 0,5:100:900.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Трифтоуксусная кислота—метанол—вода 0,5:900:100.
Растворитель. Ацетонитрил—вода 50:50.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 65 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 20 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца эфавиренза. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эфавиренза, прибавляют 30 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мг фармакопейного стандартного образца примеси 2, прибавляют 30 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25,0 мл раствора стандартного образца эфавиренза, прибавляют 2,0 мл раствора стандартного образца примеси 2 и доводят объём раствора растворителем до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.
Хроматографические условия
| Колонка | 150 × 4,6 см, силикагель нитрильный для хроматографии (1), 5 мкм; |
| Температура колонки | 40 °С; |
| Скорость потока | 1,5 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 250 нм; |
| Объём пробы | 35 мкл. |
Режим хроматографирования
|
Время, мин |
ПФА, % |
ПФБ, % |
|
0–16 |
60 → 50 |
40 → 50 |
|
16–23 |
50 → 35 |
50 → 65 |
|
23–28 |
35 → 30 |
65 → 70 |
|
28–29 |
30 → 20 |
70 → 80 |
|
29–31 |
20 |
80 |
|
31–32 |
20 → 60 |
80 → 40 |
|
32–40 |
60 |
40 |
Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Относительное время удерживания соединений (RRT) приведено в таблице 1.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси 2 и эфавиренза должно быть не менее 1,2.
На хроматограмме стандартного раствора относительное стандартное отклонение площади пика эфавиренза должно быть не более 5,0 % (6 введений).
Фактор отклика. Для расчёта содержания площади пиков примесей делятся на соответствующие факторы отклика. Факторы отклика приведены в таблице 1.
Таблица 1 – Характеристика родственных примесей эфавиренза
|
Примесь (cокращённое название) |
Химическое название по ИЮПАК |
CAS |
RRT |
Фактор отклика |
| Примесь 1
(аминоспиртэфавиренза) |
(2S)-2-(2-Амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ол | 209414-27-7 |
Около 0,48 |
0,26 |
| Примесь 2
(этеновый аналог эфавиренза) |
(4S)-4-(Трифторметил)-6-хлор-4-[(E)-циклопропилэтенил]-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он | 440124-96-9 |
Около 0,93 |
0,91 |
| Эфавиренз | – |
– |
1 |
– |
| Примесь 3
(пент-3-ен-1-ин (транс) эфавиренз) |
(4S)-4-[(3E)-Пент-3-ен-1-ин-1-ил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он |
– |
Около 1,16 |
1,0 |
| Примесь 4
(пент-3-ен-1-ин (цис) эфавиренз) |
(4S)-4-[(3Z)-Пент-3-ен-1-ин-1-ил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он |
– |
Около 1,16 |
1,0 |
| Примесь 5
(пентенеин эфавиренза) |
(4S)-4-(3-Метилбут-3-ен-1-ин-1-ил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он |
– |
Около 1,16 |
1,0 |
| Примесь 6
(пентиновый аналог эфавиренза) |
(4S)-4-(Пент-1-ин-1-ил)-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он | 205755-86-8 |
Около 1,2 |
1,0 |
| Примесь 7
(метилэфавиренз) |
4-[(2-Метилциклопропил)этинил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он | 353270-76-5 |
Около 1,28 |
1,0 |
| Примесь 8
(аминоспиртметилкарбаматэфавиренза) |
Метил(N-{[(2S)-2-гидрокси-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}карбамат) | 211563-40-5 |
Около 1,33 |
0,83 |
| Примесь 9
(аналог хинолина) |
4-(Трифторметил)-6-хлор-2-циклопропилхинолин | 391860-73-4 |
Около 1,45 |
2,0 |
| Примесь 10
(амноспирт этилкарбамат эфавиренза) |
Этил(N-{[(2S)-2-гидрокси-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}карбамат) | 211563-41-6 |
Около 1,53 |
0,83 |
| Примесь 11 | (неизвестная структура) |
– |
Около 1,60 |
1,0 |
| Примесь 12
(амноспирт бис(этоксикарбонил) эфавиренза) |
Этил(N-{[(2S)-1,1,1-трифтор-4-циклопропил-2-[(этоксикарбонил)окси]бут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}карбамат) |
– |
Около 1,63 |
0,34 |
| Примесь 13
(N-бензилэфавиренз) |
(4S)-1-[(4-Метоксифенил)метил]-4-(трифторметил)-6-хлор-4-(циклопропилэтинил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он | 174819-21-7 |
Около 1,8 |
0,71 |
| Примесь 14
(бензоиламиноспирт эфавиренза) |
N-{2-[(2S)-2-Гидрокси-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}-4-метоксибензамид | 353270-77-6 |
Около 1,9 |
0,56 |
| Примесь 15 | (неизвестная структура) |
– |
Около 2,1 |
1,0 |
| Примесь 16
(аналог циклобутенилиндола) |
Этил[3-(трифторметил)-5-хлор-2-(циклобут-2-ен-1-ил)-1H-индол-1-карбоксилат] |
– |
Около 2,18 |
0,48 |
Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:
| где |
S1 |
— | площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора; |
|
S0 |
— | площадь пика эфавиренза на хроматограмме стандартного раствора; | |
|
a0 |
— | навеска фармакопейного стандартного образца эфавиренза, мг; | |
|
a1 |
— | навеска субстанции, мг; | |
|
P |
– | содержание эфавиренза в фармакопейном стандартном образце эфавиренза, %. |
Допустимое содержание примесей:
— примесь 1 – не более 0,15 %;
— примесь 2 – не более 0,40 %;
— примесь 3 – не более 0,10 %;
— примесь 4 – не более 0,10 %;
— примесь 5 – не более 0,10 %;
— примесь 6 – не более 0,15 %;
— примесь 7 – не более 0,10 %;
— примесь 8 – не более 0,10 %;
— примесь 9 – не более 0,10 %;
— примесь 10 – не более 0,10 %;
— примесь 12 – не более 0,10 %;
— примесь 13 – не более 0,25 %;
— примесь 14 – не более 0,15 %;
— примесь 16 – не более 0,10 %;
— любая другая примесь – не более 0,10 %;
— сумма примесей – не более 1,1 %.
Не учитывают пики менее 0,05 %.
Если содержание примеси(ей) с относительным временем удерживания около 1,16 превышает 0,10 %, то выполняют метод 2.
Метод 2. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы защищают от действия света и используют свежеприготовленными. Используют только свежеоткрытую трифторуксусную кислоту со сроком хранения не более 6 мес. Для приготовления и хранения растворов, содержащих эфавиренз и его примеси, используют посуду из полипропилена.
Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил—трифторуксусная кислота—вода 400:0,5:600.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил—трифторуксусная кислота—вода 800:0,5:200.
Растворитель. Ацетонитрил—трифторуксусная кислота—вода 55:0,05:45.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 65 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 20 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца эфавиренза. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эфавиренза, прибавляют 65 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 20 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.
Хроматографические условия
| Колонка | 250 × 4,6 см, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм; |
| Температура колонки | 35 °С; |
| Скорость потока | 1,5 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 250 нм; |
| Объём пробы | 20 мкл. |
Режим хроматографирования
|
Время, мин |
ПФА, % |
ПФБ, % |
|
0–40 |
100 → 0 |
0 → 100 |
|
40–45 |
0 |
100 |
|
45–45,1 |
0 → 100 |
100 → 0 |
|
45,1–50 |
100 |
0 |
Хроматографируют раствор стандартного образца эфавиренза и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Эфавиренз – 1;
пент-3-ен-1-ин (цис) эфавиренз – около 1,10; пент-3-ен-1-ин (транс) эфавиренз – около 1,13; пентенеин эфавиренза – около 1,14.
Фактор отклика. Для расчёта содержания площади пиков примесей делятся на соответствующие факторы отклика: пент-3-ен-1-ин (цис) эфавиренз –1,1; пент-3-ен-1-ин (транс) эфавиренз – около 1,1; пентенеин эфавиренза – около 1,0.
Содержание каждой из трёх примесей в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:
| где |
Si |
— | площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора; |
|
S0 |
— | площадь пика эфавиренза на хроматограмме стандартного раствора; | |
|
a0 |
— | навеска фармакопейного стандартного образца эфавиренза, мг; | |
|
a1 |
— | навеска субстанции, мг; | |
|
P |
– | содержание эфавиренза в фармакопейном стандартном образце эфавиренза, %. |
Допустимое содержание примесей:
— примесь 3 – не более 0,10 %;
— примесь 4 – не более 0,10 %;
— примесь 5 – не более 0,10 %.
Вода. Не более 0,5 % (ОФС «Определениеводы», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.
Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Метод 1».
Стандартный раствор. В качестве стандартного раствора используют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы (раздел «Родственные примеси. Метод 1»).
Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
— разрешение (RS) между пиками примеси 2 и эфавиренза должно быть не менее 1,2;
— фактор асимметрии пика (AS) эфавиренза должен быть не более 1,8;
— относительное стандартное отклонение площади пика эфавиренза должно быть не более 1,0 % (6 определений).
Содержание эфавиренза C14H9ClF3NO2 в субстанции в процентах (X) в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
|
где |
S1 |
– |
площадь пика эфавиренза на хроматограмме испытуемого раствора; |
|
S0 |
– |
площадь пика эфавиренза на хроматограмме стандартного раствора; |
|
|
а1 |
– | навеска субстанции, мг; | |
|
а0 |
– |
навеска фармакопейного стандартного образца эфавиренза, мг; |
|
|
W |
– |
суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %; |
|
|
P |
– | содержание эфавиренза в стандартном образце эфавиренза, %. |
ХРАНЕНИЕ
В защищённом от света месте.
*Приводится для информации.