ФС.2.5.0005. Березы листья

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 г. N 120

Дата введения в действие: c 13.03.2024 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Берёзы листья	ФС.2.5.0005
Betulae folia	Взамен ФС.2.5.0005.15

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Cобранные в период вегетации, высушенные листья дикорастущих деревьев берёзы повислой (берёзы бородавчатой) – Betula pendula Roth. (Betula verrucosa Ehrh.) и берёзы пушистой – Betula pubescens Ehrh., сем. берёзовых – Betulaceae.

Содержит: не менее 1,5 % суммы флавоноидов в пересчёте на гиперозид в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Листья».

Цельное сырьё. Цельные или частично измельчённые листья, простые, черешковые, без прилистников. Листовые пластины ромбические, треугольные или треугольно-яйцевидные по форме, длиной от 3,0 до 6,5 см, шириной от 2,0 до 5,5 см. Верхушка листа заострённая, основание клиновидное, округлое. Край листовой пластинки дважды остропильчатый, мелкопильчатозубчатый или удвоеннопильчатозубчатый. Жилкование перистое. Листовая пластинка слабо опушённая по всей поверхности с обеих сторон (B. pubescens) или почти голая, с редкими волосками по краю ближе к верхушке и по жилкам с нижней стороны (B. pendula), золотисто-жёлтые блестящие желёзки по всей поверхности с обеих сторон листовой пластинки и на черешке. Цвет листьев с верхней стороны – зелёный, коричневато-зелёный, с нижней стороны – светло-зелёный, серо-зелёный, светлый коричневато-зелёный.

Запах слабый, характерный.

Измельчённое сырьё. Кусочки листовых пластинок различной формы и черешков, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 5 мм.

При рассмотрении под лупой (10×, 16×) видны кусочки листовых пластинок с дважды остропильчатым, мелкопильчатозубчатым или удвоеннопильчатозубчатым краем, с редкими волосками с обеих сторон (B. pubescens) или голые (B. pendula), с золотисто-жёлтыми блестящими желёзками по всей поверхности с обеих сторон; кусочки черешков,
редко – веточек с желтовато-белой древесиной и коричневой корой.

Цвет измельчённого сырья от зелёного до коричневато-зелёного со светло-зелёными, серо-зелёными и редкими желтовато-коричневыми, желтовато-белыми или коричневыми вкраплениями.

Запах слабый, характерный.

Порошок. Кусочки листовых пластинок различной формы и черешков, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

При рассмотрении под лупой (10×, 16×) видны кусочки листовых пластинок с мелкопильчатозубчатым или удвоеннопильчатозубчатым краем, с редкими волосками с обеих сторон (B. pubescens) или голые (B. pendula), с золотисто-жёлтыми блестящими желёзками по всей поверхности с обеих сторон; кусочки черешков, редко – веточек с желтовато-белой древесиной и коричневой корой.

Цвет порошка от зелёного до коричневато-зелёного со
светло-зелёными, серо-зелёными и редкими желтовато-коричневыми, желтовато-белыми или коричневыми вкраплениями.

Запах слабый, характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное, измельчённое сырьё. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса верхней стороны листа, состоящие из клеток правильной 4–6-угольной формы с ровными стенками. Клетки эпидермиса нижней стороны листовой пластинки в очертании более извилистые, по размерам сравнимы с клетками верхнего эпидермиса или несколько мельче. Устьица аномоцитного типа. Околоустьичных клеток 4–8, чаще 6. Устьица расположены преимущественно с нижней стороны листовой пластинки. На поперечном срезе должен быть виден двух-, трёхслойный столбчатый мезофилл. В обкладочной паренхиме жилок листовой пластинки локализованы крупные ромбической формы кристаллы и мелкие друзы кальция оксалата.

На эпидермисе должны быть видны крупные щитковидные желёзки, расположенные с обеих сторон листа, чаще по жилкам. Желёзки с крупными бесцветными головками. Головки состоят из большого количества клеток и расположены лучами от центра. Кутикула над головкой мощная, чешуйчатая, нередко отслаивается, обнажая клетки, формирующие головку трихомы. Клетки ножки желёзок, как правило, окрашены пигментом
тёмно-коричневого цвета. Кутикула обусловливает глянцевую, слегка шершавую поверхность листа. По жилкам и по краю листовой пластинки встречаются простые одноклеточные волоски с толстыми стенками, расширенным основанием и заострённой верхушкой. Вблизи жилок видны друзы кальция оксалата. Щитковидные желёзки характерного строения и редкие мелкие волоски видны на эпидермисе черешка листа.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов порошка должны быть видны фрагменты: эпидермиса верхней стороны листа, состоящего из клеток правильной 4–6-угольной формы; эпидермиса нижней стороны листа с извилистыми стенками клеток; эпидермиса листа с округлыми устьицами аномоцитного типа; жилок с крупными кристаллами призматической формы и мелкими друзами в обкладочной паренхиме; эпидермиса листа с крупными щитковидными желёзками; жилок и края листа с простыми одноклеточными волосками с толстыми стенками, расширенным основанием и заострённой верхушкой; эпидермиса черешка с щитковидными желёзками и мелкими простыми волосками; а также отдельные отпавшие щитковидные желёзки и простые волоски.

Рисунок 1 – Берёзы листья

1 – фрагмент эпидермиса нижней стороны листа: a – устьица аномоцитного типа,

б – желёзка (200×); 2 – фрагмент эпидермиса черешка с мелким
простым волоском (200×); 3 – простые толстостенные волоски (200×);
4 – друзы (a) и призматические кристаллы (б) кальция оксалата (200×).

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ВЭТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Муравьиная кислота безводная—вода—метилэтилкетон—этилацетат 10:10:30:50.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм.

Помещают 0,5 г измельчённого сырья в коническую колбу вместимостью 50 мл, добавляют 5 мл спирта 96 % и экстрагируют на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр.

Раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,5 мг гиперозида, растворяют в спирте 96 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1 % в спирте 96 %.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5 %.

На линию старта пластинки полосами длиной 8 мм и шириной 2 мм наносят по 2 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца гиперозида. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 20 мин камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, выдерживают при температуре 100–105 °С в течение 5 мин. Тёплую пластинку опрыскивают реактивом для детектирования 1, затем опрыскивают реактивом для детектирования 2 и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. На хроматограмме раствора стандартного образца гиперозида должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией жёлтого, жёлто-зелёного или жёлто-оранжевого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: зона адсорбции голубого цвета, над ней зона адсорбции жёлтого,
жёлто-зелёного или жёлто-оранжевого цвета на уровне зоны адсорбции гиперозида; выше три зоны адсорбции жёлтого, жёлто-оранжевого,
жёлто-коричневого или оранжевого цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 12,0 % (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 7,0 % (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 2,0 % (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельчённость сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Цельное сырьё: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5 %.

Измельчённое сырьё: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм, – не более 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, – не более 5 %.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, – не более 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, – не более 5 %.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Другие части растения (ветки, части соцветий). Цельное сырьё, измельченное сырьё: не более 5 %.

Сырьё, изменившее окраску (потемневшее и почерневшее). Цельное сырьё, измельчённое сырьё: не более 5 %.

Органическая примесь. Цельное сырьё, измельчённое сырьё: не более 1 %.

Минеральная примесь. Не более 1 %.

Тяжёлые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Заражённость вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени заражённости лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Помещают 1,0 г (точная навеска) измельчённого сырья в коническую колбу вместимостью 250 мл с притёртой пробкой, прибавляют 100 мл спирта 50 % и взвешивают с погрешностью ±0,01 г. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 2 ч.

Полученное извлечение охлаждают до комнатной температуры и взвешивают, при необходимости доводят спиртом 50 % до первоначальной массы, фильтруют через беззольный фильтр.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора, прибавляют 1,0 мл алюминия хлорида раствора 2 % в спирте 96 % и 1 каплю уксусной кислоты разведённой 30 %, доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора прибавляют, 1 каплю уксусной кислоты разведённой 30 % и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Исходный раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,02 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гиперозида, растворяют в 35 мл спирта 70 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора стандартного образца гиперозида, прибавляют 1 мл алюминия хлорида раствора 2 % в спирте 96 % и 1 каплю уксусной кислоты разведённой 30 % и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Раствор сравнения стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора стандартного образца гиперозида, прибавляют 1 каплю уксусной кислоты разведённой 30 % и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Через 30 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца гиперозида в тех же условиях относительно раствора сравнения стандартного образца гиперозида.

Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на гиперозид в сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	A	–	оптическая плотность испытуемого раствора;
		–	оптическая плотность раствора стандартного образца гиперозида;
	a	–	навеска сырья, г;
		–	навеска фармакопейного стандартного образца гиперозида, г;
	P	–	содержание гиперозида в фармакопейном стандартном образце гиперозида, %;
	W	–	влажность сырья, %.

Допускается содержание суммы флавоноидов вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса гиперозида с алюминия хлоридом по формуле:

где	A	—	оптическая плотность испытуемого раствора;
	а	—	навеска сырья, г;
	380	—	удельный показатель поглощения комплекса гиперозида с алюминия хлоридом при длине волны 410 нм ();
	W	—	влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».