ФС.2.1.0129. Меркаптопурин моногидрат
утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377
Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Меркаптопурин моногидрат | ФС.2.1.0129 |
Меркаптопурин | |
Mercaptopurinum monohydricum | Взамен ФС.2.1.0129.18 |
|
|
C5H4N4S·H2O |
М.м. 170,19 |
[6112-76-1] |
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
7H-Пурин-6-тиол моногидрат.
Содержит не менее 99,0 % и не более 101,0 % меркаптопурина C5H4N4S в пересчёте на безводное и свободное от остаточных растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Жёлтый кристаллический порошок без запаха или почти без запаха.
Растворимость. Растворим в горячей воде и серной кислоте разведённой 16 %, умеренно растворим в натрия гидроксида растворе 0,1 М, мало растворим в хлористоводородной кислоте разведённой 8,3 %, практически нерастворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейный стандартного образца изониазида.
2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»)
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в 5 мл диметилсульфоксида и доводят объём раствора хлористоводородной кислотой 0,37 % до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора хлористоводородной кислотой 0,37 % до метки.
Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 230 до 350 нм должен иметь только один максимум при 325 нм.
3. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 0,5 мл натрия гидроксида раствора 10 %, доводят объём раствора водой до 2 мл и прибавляют 0,5 мл свежеприготовленного натрия нитропруссида раствора 1 %. Полученный раствор встряхивают; должно появиться желтовато-зелёное окрашивание, переходящее при подкислении хлористоводородной кислотой разведённой 8,3 % в тёмно-зелёное.
4. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл аммиака раствора 10 % и прибавляют по каплям свежеприготовленную смесь равных объёмов меди(II) хлорида раствора 3 % и гидроксиламина гидрохлорида раствора 20 %; должен выпасть оранжево-жёлтый осадок.
ИСПЫТАНИЯ
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
Подвижная фаза А (ПФА). Метанол—муравьиной кислоты безводной раствор 0,1 % о/о 20:980.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол—муравьиной кислоты безводной раствор 0,1 % о/о 500:500.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 12 мг субстанции, растворяют в 2,5 мл метанола и доводят объём раствора муравьиной кислоты безводной раствором 0,1 % о/о до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 4,5 мг стандартного образца примеси А и 3,0 мг стандартного образца примеси В, растворяют в ПФА и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём ПФА до метки.
Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 3 мг стандартного образца примеси D, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида и доводят объём раствора ПФА до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФА до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём муравьиной кислоты безводной раствором 0,1 % о/о до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём муравьиной кислоты безводной раствором 0,1 % о/о до метки.
Примечание
Примесь А (гипоксантин): 1,7-Дигидро-6H-пурин-6-он [68-94-0].
Примесь В (аденин): 7H-пурин-6-амин [443-72-1].
Примесь D: 6,6’-дисульфанедиил-7-H-пурин [90947-51-6].
Хроматографические условия
Колонка | 100 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 3 мкм; |
Температура колонки | 30 °С; |
Температура образца | 4 °С; |
Скорость потока | 1,0 мл/мин; |
Детектор | спектрофотометрический, 260 нм; |
Объём пробы | 50 мкл. |
Режим хроматографирования
Время, мин |
ПФА, % |
ПФБ, % |
0–8 |
100 |
0 |
8–20 |
100 → 0 |
0 → 100 |
20–25 |
0 |
100 |
25–30 |
0 → 100 |
100 → 0 |
Хроматографируют стандартный раствор, раствор стандартного образца примеси D, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Меркаптопурин – 1 (около 6 мин); примесь В – около 0,3; примесь А – около 0,5; примесь D – около 3,5.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей А и В используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора; для идентификации пика примеси D используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца примеси D.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора разрешение (RS) между пиками примесей В и А должно быть не менее 5,0.
Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания площадь пика примеси D умножают на 0,25.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
— площадь пика примеси А не должна превышать площадь пика примеси А на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,15 %);
— площадь пика примеси B не должна превышать площадь пика примеси B на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,10 %);
— площадь пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10 %);
— площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10 %);
— сумма примесей не должна превышать 0,3 %.
Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).
Вода. Не менее 10,0 % и не более 12,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3А или 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции в 50 мл диметилформамида и титруют 0,1 М раствором тетрабутиламмония гидроксида. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора тетрабутиламмония гидроксида соответствует 15,22 мг безводного меркаптопурина C5H4N4S.
ХРАНЕНИЕ
Хранение. В герметично закрытой упаковке в защищённом от света месте.