ФС.2.1.0175. Рутозид тригидрат

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Рутозид тригидрат	ФС.2.1.0175
Рутозид
Rutosidum trihydricum	Взамен ФС.2.1.0175.18

 

C27H30O16·3H2O	М.м. 664,56
[250249-75-3]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

3-{[6-O-(6-дезокси-α-L-маннопиранозил)-β-D-глюкопиранозил]окси}-2-(3,4-дигидроксифенил)- 5,7-Дигидрокси-4H-1-бензопиран-4-он тригидрат.

СВОЙСТВА

Cодержит не менее 95,0 % и не более 101,0 % рутозида С₂₇H₃₀O₁₆ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Жёлтый или зеленовато-жёлтый кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в метаноле, умеренно или мало растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в воде.

*Растворяется в растворах гидроксидов щелочных металлов.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС«Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца рутозида тригидрата.

2. Спектрофотометрия (ОФС«Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в метаноле и доводят этим же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мл полученного раствора и доводят объём раствора метанолом до метки. Раствор используют свежеприготовленным.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области спектрального диапазона от 210 до 450 нм должен иметь максимумы при 257 нм и 358 нм. Удельное поглощение при максимуме поглощения при 358 нм должно быть от 305 до 330 нм (безводное вещество).

3. Тонкослойная хроматография (ОФС«Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в метаноле, доводят этим же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца рутозида тригидрата. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца рутозида тригидрата, растворяют в метаноле, доводят этим же растворителем до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Бутанол―уксусная кислота безводная―вода―метилэтилкетон―этилацетат 5:10:10:30:50.

На линию старта хроматографической пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (25 мкг) и раствора стандартного образца рутозида тригидрата (25 мкг).

Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в (предварительно насыщенную, в течение 1 ч) камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают смесью 2,5 мл железа (III) хлорида раствора 10 % и 7,5 мл раствора калия феррицианида и просматривают в течение 10 мин в видимом свете.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению и окраске должна соответствовать зоне адсорбции рутозида тригидрата на хроматограмме раствора стандартного образца рутозида тригидрата.

4. Качественная реакция. Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл спирта 96 %, прибавляют 1 г цинка и 2 мл хлористоводородной кислоты раствора 25 %. Раствор должен окраситься в красный цвет.

ИСПЫТАНИЯ

Вещества нерастворимые в метаноле. Не более 3,0 %.

Испытуемый раствор. Встряхивают 2,5 г субстанции в 50 мл метанола при температуре 20–25 °С в течение 15 мин. Раствор фильтруют при пониженном давлении через фильтр из пористого стекла с диаметром пор 1,6 мкм, предварительно высушенный в течение 15 мин при температуре 100–105 °C, охлаждённый в эксикаторе и взвешенный. Фильтр промывают тремя порциями метанола по 20 мл, сушат при температуре 100–105 °C в течение 30 мин, охлаждают и взвешивают. Масса вещества на фильтре не должна превышать 75 мг.

Светопоглощающие примеси. Спектр поглощения полученного раствора в диапазоне длин волн от 450 до 800 нм в кювете с толщиной слоя 1 см не должен превышать 0,10.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,2 г субстанции, растворяют в 40 мл 2-пропанола, перемешивают в течение 15 мин, доводят объём раствора до метки и фильтруют. В качестве раствора сравнения используют 2-пропанол.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы должны быть свежеприготовленными.

Буферный раствор. В химическом стакане вместимостью 1000 мл помещают 15,6 г натрия дигидрофосфата дигидрата, растворяют в 900 мл воды, доводят рН раствора фосфорной кислотой концентрированной до 3,0. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объём раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Подвижная фаза А (ПФА). Тетрагидрофуран—буферный раствор 5:95.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Тетрагидрофуран—буферный раствор 40:60.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в 20 мл метанола и доводят объём раствора ПФБ до метки.

Раствор стандартного образца рутозида тригидрата. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10,0 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца рутозида тригидрата, растворяют в 2 мл метанола и доводят объём раствора ПФБ до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора, доводят объём раствора ПФБ до метки и перемешивают.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1 мл раствора сравнения, доводят объём раствора ПФБ до метки и перемешивают. Концентрация раствора составляет 0,1 % от концентрации испытуемого раствора.

Примечание

Примесь А: 5,7-дигидрокси-3-(β-D-глюкофуранозилокси)-2-(3,4-дигидроксифенил)-4H-1-бензопиран-4-он (изокверцитрозид). [21637-25-2].

Примесь В: 5,7-дигидрокси-2-(4-гидроксифенил)-3-{[6-O-(6-дезокси-α-L-маннопиранозил)-β-D-глюкопиранозил]окси}-4H-1-бензопиран-4-он. [17650-84-9].

Примесь С: 3,5,7-тригидрокси-2-(3,4-дигидроксифенил)-4H-1-бензопиран-4-он (кверцетин). [117-39-5].

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,0 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	30 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 280 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–10	50 → 0	50 → 100
10–15	0	100
15–16	0 → 50	100 → 50
16–20	50	50

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца рутозида тригидрата, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Рутозид – 1 (около 7 мин); примесь В – около 1,1; примесь А – около 1,2; примесь С – около 2,5.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца рутозида тригидрата разрешение (R) между пиками рутозида и примеси B должно быть не менее 2,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примеси А – 0,8; примеси В – 1,0; примеси С – 0,5.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь каждого из пиков примесей А, В и С не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0 %);

— суммарная площадь пиков всех примесей не должна превышать двукратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 4,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,1 %).

Содержание любой единичной примеси в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	–	среднее значение площади пика любой единичной примеси на хроматограммах испытуемого раствора;
	S0	–	среднее значение площади пика рутозида на хроматограммах раствора сравнения;
	a1	–	навеска субстанции, мг;
	a0	–	навеска фармакопейного стандартного образца рутозида тригидрата, мг;
	P	–	содержание рутозида тригидрата в стандартном образце рутозида тригидрата, %;
	K	–	поправочный коэффициент для единичной примеси.

Суммарное содержание примесей в субстанции вычисляют арифметическим сложением найденного содержания каждой единичной примеси.

Вода. От 7,5 % до 9,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,10 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,2 г (точная навеска) субстанции в 20 мл диметилформамида и титруют 0,1 М раствором тетрабутиламмония гидроксида. Конечную точку титрования определяют потенциометрически.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора тетрабутиламмония гидроксида соответствует 30,53 мг рутозида С₂₇H₃₀O₁₆.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.