ОФС.1.2.1.2.0006. Сверхкритическая флюидная хроматография

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Сверхкритическая флюидная хроматография	ОФС.1.2.1.2.0006
	Взамен ОФС.1.2.1.2.0006.15

Cверхкритическим флюидом или сверхкритической жидкостью называется вещество, находящееся при значениях температуры и давления выше критических, при которых свойства вещества являются промежуточными между свойствами жидкости и газа. Хроматографический процесс, в котором в качестве подвижной фазы используется жидкость в сверхкритическом состоянии или около него, называется сверхкритической флюидной хроматографией.

Сверхкритическая флюидная хроматография основана на механизмах адсорбции или распределения масс.

С точки зрения применения флюида в качестве подвижной фазы в хроматографии важны его плотность, коэффициенты диффузии и вязкость:

— коэффициенты диффузии в сверхкритических фазах примерно на порядок больше коэффициентов диффузии в жидкостях, но примерно на порядок меньше, чем в газах;

— вязкость сверхкритических флюидов примерно на порядок меньше, чем жидкостей, но примерно на порядок больше, чем газов;

— растворяющая способность вещества в состоянии сверхкритического флюида больше, чем в состоянии газа;

— плотность основных флюидов, используемых в хроматографии, примерно на 2–3 порядка больше плотности газов и в несколько раз меньше плотности соответствующих жидкостей.

Применительно к сверхкритической флюидной хроматографии это означает что:

— достигаются меньшие времена анализа по сравнению с высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ);

— оптимальное значение линейной скорости потока выше, чем в ВЭЖХ;

— падение давления на колонке значительно меньше, чем в ВЭЖХ, что даёт возможность использования колонок большей длины;

— хроматографическая эффективность в сверхкритической флюидной хроматографии выше, чем в ВЭЖХ (хотя и ниже, чем в газовой хроматографии).

— проведение разделения при более низких температурах, чем это принято в газовой хроматографии, без существенной потери эффективности;

— проведение разделения соединений с большей молекулярной массой, чем это допускается в газовой хроматографии.

Оборудование

хроматографическая система для сверхкритической флюидной хроматографии состоит из охлаждаемой насосной системы, инжектора, хроматографической колонки, помещённой в термостат, детектора, автоматического регулятора давления и системы сбора и обработки данных.

Насосная система необходима для подачи подвижной фазы с постоянной скоростью потока. Колебания давления должны быть сведены к минимуму, например, путём пропускания растворителя под давлением через устройство гашения импульсов. Трубки и соединения должны выдерживать создаваемое насосной системой давление.

Системы с микропроцессорным управлением подают подвижную фазу в постоянных или изменяющихся условиях в соответствии с заданной программой. В случае градиентного элюирования используются насосные системы, подающие растворители из нескольких резервуаров, а смешивание растворителей достигается как положительным, так и отрицательным давлением насосов.

Инжекторы. Ввод пробы осуществляется непосредственно в колонку с помощью специального крана-дозатора.

Неподвижные фазы, используемые в сверхкритической флюидной хроматографии, аналогичны применяемым в ВЭЖХ (набивные колонки) и в газовой хроматографии (капиллярные колонки). Максимальный внутренний диаметр капиллярной колонки 100 мкм. Хроматографическая колонка должна быть термостатирована и в ней должно поддерживаться определённое давление. Для этого используются специальные устройства – автоматические регуляторы давления.

Подвижные фазы. В качестве подвижной фазы в сверхкритической флюидной хроматографии могут использоваться различные жидкости, однако чаще всего используется углерода диоксид с различными полярными модификаторами. Это обусловлено его прозрачностью в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, низкой токсичностью, отсутствием запаха и дешевизной. В качестве полярных модификаторов используются метанол, 2-пропанол, ацетонитрил и циклические эфиры.

В качестве других подвижных фаз применяют азота(I) оксид, аммиак, метанол, н-бутан, диэтиловый эфир, дифтордихлорметан.

Состав, давление или плотность, температура и скорость потока предписанной подвижной фазы могут быть либо постоянными на протяжении всей хроматографической процедуры (изократическое, изоплотностное, изотермическое элюирование), либо могут изменяться в соответствии с заданной программой (градиентное элюирование модификатора, давление или плотность, температура или скорость потока).

Детекторы. Наиболее часто в сочетании со сверхкритической флюидной хроматографией используются спектрофотометрический и пламенно-ионизационный детекторы. Кроме того, возможно применение и других детекторов, используемых в ВЭЖХ и газовой хроматографии, таких как масс-спектрометрический, пламенно-фотометрический, электронозахватный, флуориметрический, ИК-детектор, катарометр и детектор светового рассеяния.

Методика

Готовят испытуемые и стандартные растворы, проводят определение как описано в методике испытания. Растворы не должны содержать твёрдых частиц.

Критерии пригодности хроматографической системы и диапазоны допустимых изменений хроматографических параметров описаны в ОФС «Хроматография».

Проводят определение, как описано в методике испытания.