ФС.2.1.0403. Дарунавира этанолат

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Дарунавира этанолат	ФС.2.1.0403
Дарунавир
Darunaviri ethanolas	Вводится впервые

 

C27H37N3O7S·С2H6O	М.м. 593,7
[635728-49-3]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

[(3R,3aS,6aR)-Гексагидрофуро[2,3-b]фуран-3-ил](N-{(2S,3R)-4-[4-амино—N-(2-метилпропил)бензолсульфонамидо]-3-гидрокси-1-фенилбутан-2-ил}карбамат)—этанол (1:1).

Содержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % дарунавира этанолата C₂₇H₃₇N₃O₇S·C₂H₆O в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Порошок от белого до светло-жёлтого или светло-коричневого цвета.

Растворимость. Легко растворим в ацетоне и этилацетате, умеренно растворим в метаноле, очень мало растворим или практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см−1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца дарунавира этанолата.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и фармакопейный стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объёмах метиленхлорида, выпаривают досуха при 60 °С и записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика дарунавира на хроматограмме раствора стандартного образца дарунавира этанолата (раздел «Количественное определение. ВЭЖХ»).

ИСПЫТАНИЯ

Угол вращения. От –5,0° до +5,0° (1 % раствор субстанции в метаноле при длине кюветы 2 дм, ОФС «Оптическое вращение»).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы, содержащие дарунавира этанолат и его примеси, используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). Фосфорная кислота концентрированная—вода 1:1000.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Фосфорная кислота концентрированная—метанол—ацетонитрил 1:150:850.

Растворитель. Ацетонитрил—вода 30:70.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 55 мг субстанции, прибавляют 15 мл ацетонитрила, перемешивают, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин, прибавляют 25 мл воды, охлаждают до комнатной температуры, доводят объём раствора водой до метки и фильтруют.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в 2 мл ацетонитрила и доводят объём раствора растворителем до метки. В коническую колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора, прибавляют 1 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, перемешивают и выдерживают в течение 15 мин при температуре 40 °С. Охлаждают раствор до комнатной температуры, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М, перемешивают и фильтруют.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	45 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 265 нм;
Объём пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–5	70	30
5–15	70 → 50	30 → 50
15–25	50	50
25–40	50 → 40	50 → 60
40–45	40	60
45–55	40 → 25	60 → 75
55–60	25	75
60–65	25 → 70	75 → 30
65–75	70	30

Уравновешивают колонку смесью ПФА—ПФБ 70:30 при скорости потока 1,0 мл/мин в течение не менее 40 мин.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы и испытуемый раствор.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы должны присутствовать два пика – продукта разложения с относительным временем удерживания около 0,96 и дарунавира.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы:

— отношение сигнал/шум (S/N) для пика дарунавира должно быть не менее 10;

— относительное стандартное отклонение площади пика дарунавира должно быть не более 10,0 % (6 введений).

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

— разрешение (R_S) между пиками продукта разложения с относительным временем удерживания около 0,96 и дарунавира должно быть не менее 2,0;

— фактор асимметрии пика (A_S) дарунавира должен быть не более 1,5;

— эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику дарунавира, должна составлять не менее 10 000 теоретических тарелок.

Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

— любая примесь – не более 0,4 %;

— сумма примесей – не более 1,2 %.

Не учитывают пики, содержание каждой из которых составляет менее 0,05 % от суммы площадей всех пиков.

Этанол. От 6,0 до 8,5 %. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Раствор внутреннего стандарта. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 200 мл диметилформамида, прибавляют 50 мкл 2-метилпропанола и доводят объём раствора диметилформамидом до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в растворе внутреннего стандарта и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 80 мл раствора внутреннего стандарта, прибавляют 5,0 мл этанола и доводят объём раствора раствором внутреннего стандарта до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 30 мл раствора внутреннего стандарта, прибавляют 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора раствором внутреннего стандарта до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 40 мл раствора внутреннего стандарта, прибавляют 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора раствором внутреннего стандарта до метки.

Хроматографические условия

Колонка	кварцевая капиллярная 30 м × 0,53 мм, покрытая слоем поли(цианопропилфенил)(6)(метил)(94) силоксана, 3,0 мкм;
Детектор	пламенно-ионизационный;
Газ-носитель	гелий для хроматографии;
Деление потока	1:4;
Скорость потока	4 мл/мин (30 см/с);
Объём пробы	1 мкл;
Время хроматографирования	17 мин.

Температурная программа

	Время, мин	Температура, °C
Колонка	0–2,5	65
	2,5–3,5	65 → 100
	3,5–5,5	100
	5,5–7,5	100 → 160
	7,5–10,0	160
	10,0–13,2	160 → 240
	13,2–16,2	240
Инжектор		180
Детектор		250

Время удерживания соединений: этанол – около 3 мин, 2-метилпропанол – около 5 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:

— фактор асимметрии пика (A_S) этанола должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение отношения площади пика этанола к площади пика внутреннего стандарта должно быть не более 3,0 % (6 введений).

Содержание этанола C₂H₆O в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	B1	–	отношение площади пика этанола к площади пика 2-метилпропанола на хроматограмме испытуемого раствора;
	B0	–	отношение площади пика этанола к площади пика 2-метилпропанола на хроматограмме стандартного раствора;
	a1	–	навеска субстанции, мг;
	P	–	содержание основного вещества в этаноле, %;
		–	плотность этанола, мг/мл.

Вода. Не более 2,0 % (ОФС «Определение воды»,метод 1). Для определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография») или титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

Все растворы, содержащие дарунавира этанолат, используют свежеприготовленными.

1. ВЭЖХ

Растворитель. Ацетонитрил—вода 30:70.

Подвижная фаза (ПФ). Фосфорная кислота концентрированная—вода—метанол 1:400:600.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 5 мл ацетонитрила, перемешивают до растворения и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца дарунавира этанолата. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца дарунавира этанолата, прибавляют 5 мл ацетонитрила, перемешивают до растворения и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	45 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 265 нм;
Объём пробы	10 мкл;
Время хроматографирования	15 мин.

Хроматографируют раствор стандартного образца дарунавира этанолата и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца дарунавира этанолата:

— фактор асимметрии пика (A_S) дарунавира должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение площади пика дарунавира должно быть не более 1,0 % (6 введений);

— эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику дарунавира, должна составлять не менее 3000 теоретических тарелок.

Содержание дарунавира этанолата C₂₇H₃₇N₃O₇S·C₂H₆O в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах () вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика дарунавира на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика дарунавира на хроматограмме раствора стандартного образца дарунавира;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца дарунавира этанолата, мг;
	P	–	содержание дарунавира этанолата в фармакопейном стандартном образце дарунавира этанолата, %;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

2. Титриметрия

Растворяют 0,3 г (точная навеска) субстанции в 30 мл уксусной кислоты безводной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»), используя стеклянный индикаторный электрод.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 59,37 мг дарунавира этанолата C₂₇H₃₇N₃O₇S·C₂H₆O.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.