ФС.2.1.0339. Эритромицин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Эритромицин	ФС.2.1.0339
Эритромицин
Erythromycinum	Взамен ФС 42-3577-98

 

Эритромицин A	R=OH	R1=CH3	C37H67NO13	[114-07-8]	М.м. 733,9
Эритромицин B	R=H	R1=CH3	C37H67NO12	[527-75-3]	М.м. 717,9
Эритромицин C	R=OH	R1=H	C36H65NO13	[1675-02-1]	М.м. 719,9

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Смесь антибиотиков-макролидов, продуцируемых штаммом Streptomyces erythreus, основным компонентом является эритромицин A: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-Тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-α-рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-β-D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион.

Cодержит не менее 93,0 % и не более 102,0 % суммы эритромицинов A, B и C, из них эритромицинов B и C не более 5 % каждого в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество. Содержит не менее 930 мкг/мг и не более 1020 мкг/мг в пересчёте на безводное вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или светло-жёлтый порошок или бесцветные или светло-жёлтые кристаллы.

*Гигроскопичен, проявляет полиморфизм.

Растворимость. Легко растворим в этаноле 96 %, растворим в метаноле, мало растворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»).

Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца эритромицина A.

Если спектры различаются, по 50 мг субстанции и фармакопейного стандартного образца эритромицина A растворяют отдельно в 1 мл метиленхлорида, упаривают и сушат при температуре 60 °С в течение 3 ч при остаточном давлении не более 0,67 кПа (5 мм. рт. ст.).

Не учитывают полосы поглощения в области от 1980 до 2050 см–1.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза. Тщательно перемешивают 4 объёма 2-пропанола,
8 объёмов раствора ацетата аммония раствора 15 %, предварительно доведённого до pH 9,6 аммиака раствором концентрированным 25 %, и 9 объёмов этилацетата. После расслаивания смеси используют верхний слой.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10,0 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки тем же растворителем.

Раствор стандартного образца эритромицина А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца эритромицина A, растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки тем же растворителем.

Раствор стандартного образца спирамицина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца спирамицина, растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки тем же растворителем.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (10 мкг) и растворов стандартных образцов эритромицина А (10 мкг) и спирамицина (5 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают спиртовым сернокислым раствором анисового альдегида, сушат при температуре 110 °С в течение 5 мин и просматривают в видимом свете.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окраски должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина А и отличаться по положению и окраске от основной зоны адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца спирамицина.

3. Качественная реакция. К 5,0 мг субстанции прибавляют 5 мл раствора ксантгидрола и нагревают на водяной бане; появляется красное окрашивание.

4. Качественная реакция. Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл 25 % хлористоводородной кислоты; через 10–20 мин появляется жёлтое окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ
(ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Смесь растворителей. Метанол—фосфатный буферный раствор pH 7,0 1:3.

Буферный раствор. 35,0 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900 мл воды, при необходимости доводят pH до 9,0 2 М фосфорной кислотой, и доводят объём раствора водой до 1000 мл.

Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 50 мл буферного раствора, 400 мл воды, 165 мл
2-метил-2-пропанола, 30 мл ацетонитрила и доводят объём раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью до метки.

Раствор стандартного образца эритромицина A. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина A, растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина B и 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина C, растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси B, растворяют в 20 мл стандартного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца эритромицина А и доводят объём раствора стандартным раствором до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 3,0 мл раствора стандартного образца эритромицина A и доводят объём смесью растворителей до метки.

Раствор для идентификации пиков. Распределяют 40 мг фармакопейного стандартного образца эритромицина A по дну бюкса тонким (не более 1 мм) слоем, нагревают при температуре 130 °С в течение 4 ч, охлаждают и растворяют в 10,0 мл смеси растворителей.

Примечание

Эритромицин B: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12S,13R,14R)-7,12-дигидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [527-75-3].

Эритромицин C: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-a-рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[(3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-a-D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [1675-02-1].

Примесь B: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-α-рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(метиламино)-β-D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [992-62-1].

Примесь E: (2R,3R,4S,5R,8R,9S,10S,11R,12R)-3,4-дигидрокси-9-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-α-L-рибо-гексопиранозил)окси]-2,4,8,10,12,14-гексаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-β-D-ксило-гексопиранозил]oxy}-5-этил-6,15-диоксабицикло[10.2.1]пентадец-1(14)-ен-7-он [33396-29-1].

Примесь F: (2R,3R,6R,7S,8S,9R,10R)-3-[(2R,3R)-2,3-Дигидроксипентан-2-ил]-7-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-α-L-рибо-гексопиранозил)окси]-2,6,8,10,12-пентаметил-9-{[3,4,6-тридезоакси-3-(диметиламино)-β-D-ксило-гексопиранозил]окси}-4,13-диоксабицикло[8.2.1]тридец-1(12)-ен-5-он [105882-69-7].

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, сополимер стирол-дивинилбензола для хроматографии, 8 мкм, размер пор 100 нм;
Температура колонки	70 °С (термостатируют также не менее 1/3 предшествующего колонке капилляра);
Скорость потока	2,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 215 нм;
Объём пробы	100 мкл;
Время хроматографирования	5-кратное от времени удерживания основного пика.

Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца эритромицина A, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Эритромицин A – 1 (около 15 мин); примесь E – около 4.3; эритромицин B – около 1,8; примесь F – около 1,5; эритромицин C – около 0,5; примесь B – около 0,45.

Идентификация примесей. Для идентификации эритромицинов B и C и примеси B используют хроматограммы растворов для проверки разделительной способности хроматографической системы и стандартного раствора, примесей E и F – по хроматограмме раствора для идентификации и относительным временам удерживания соединений.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы:

— разрешение (R) между пиками примеси B и эритромицина C должно быть не менее 0,8;

— разрешение (R) между пиками примеси B и эритромицина A должно быть не менее 5,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания следующих примесей площади пиков умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь E– 0,09; примесь F– 0,15.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 3 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 2,3 раза превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 7 %).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,02 площади пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,06 %), и пики эритромицинов B и C.

Тиоцианат-ионы. Не более 0,3 %. Определяют методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Все растворы готовят непосредственно перед использованием и защищают от света.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в 20 мл метанола, прибавляют 1,0 мл железа(III) хлорида раствора 9 % и доводят объём раствора метанолом до метки.

Эталонный раствор (готовят в двух повторностях). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г предварительно высушенного при температуре 105 °С в течение 1 ч калия тиоцианата, растворяют в метаноле и доводят объём раствора до метки тем же растворителем. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл 9 % раствора хлорида железа(III) и доводят объём раствора метанолом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл железа(III) хлорида раствора 9 % и доводят объём раствора метанолом до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого и эталонных растворов при длине волны 492 нм относительно раствора сравнения.

Пригодность системы. Система считается пригодной, если отношение S находится в пределах от 0,985 до 1,015:

,

где	A1 и A2	—	оптическая плотность эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно;
	a1 и a2	—	навески калия тиоцианата при приготовлении эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно, г.

Содержание тиоцианат-ионов в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где	A	—	оптическая плотность испытуемого раствора;
	a	—	навеска субстанции, г;
	58,08	–	относительная молекулярная масса тиоцианат-иона;
	97,18		относительная молекулярная масса тиоцианата калия.

Вода. Не более 6,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции и в качестве растворителя раствор имидазола в метаноле 0,1 г/мл.

Сульфатная зола. Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с
ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1. ВЭЖХ. Определение проводят в условиях испытания «Родственные примеси».

Содержание эритромицина A C₃₇H₆₇NO₁₃ в субстанции в процентах (X) в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика эритромицина A на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина A;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного  стандартного образца эритромицинаA, мг;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей, %;
	P	–	содержание эритромицина A в фармакопейном стандартном образце эритромицина A, %.

Содержание эритромицина B C₃₇H₆₇NO₁₂ и эритромицина C C₃₆H₆₅NO₁₃ в субстанции в процентах (X) в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца эритромицина B или эритромицина C, соответственно, мг;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей, %;
	P	–	содержание эритромицина B или эритромицина C в фармакопейном стандартном образце эритромицина B или эритромицина C, соответственно, %.

2. Микробиологический метод. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.

 

*Приводится для информации.