ФС.2.1.0206. Хлорамбуцил

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Хлорамбуцил	ФС.2.1.0206
Хлорамбуцил
Chlorambucilum	Взамен ФС.2.1.0206.18

 

C14H19Cl2NO2	М.м. 304,21
[305-03-3]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

4-{4-[Бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота.

Cодержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % хлорамбуцила C₁₄H₁₉Cl₂NO₂ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции  в области от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила.

2. Качественная реакция. В 2 мл спирта 96 % растворяют 50 мг субстанции, прибавляют 0,5 мл серебра нитрата раствора 0,1 М и нагревают в течение 2 мин на кипящей водяной бане; должен выпасть белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления. От 64 до 68 °C (ОФС «Температура плавления», метод 1).

Родственные примеси

1. Примесь G. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4–8 °С в защищённом от света месте не более суток.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол—трифторуксусной кислоты раствор 1 % 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила, содержащего примесь G, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Примечание

Примесь G: 4-{2-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота [178481-89-5] или 4-{3-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота [134862-11-6].

Хроматографические условия

Колонка	150 × 3,9 мм, силикагель фенилсилильный для хроматографии, 4 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	1,8 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 260 нм;
Объём пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	2-кратное от времени удерживания основного пика.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Хлорамбуцил – 1 (около 11 мин); примесь G – около 1,2.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси G используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками хлорамбуцила и примеси G должно быть не менее 1,5.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика примеси G не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4 %).

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными и защищают от света.

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 1,9 г аммония ацетата в 800 мл воды и доводят значение рН уксусной кислотой до 3,9, переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Хлористоводородная кислота 1 %—ацетонитрил 10:90.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила для проверки пригодности хроматографической системы, содержащего примеси B и E, растворяют в растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Примечание

Примесь В: 4-{4-[(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота [116505-53-4].

Примесь Е: 4-[4-({2-[(4-{4-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутаноил)окси]этил}(2-хлорэтил)амино)фенил]бутановая кислота [1988791-13-4].

Хроматографические условия

Колонка	250 × 3,0 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	0,8 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 260 нм;
Объём пробы	10 мкл;
Время хроматографирования	2-кратное от времени удерживания основного пика.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–5	60	40
5–15	60 → 10	40 → 90
15–25	10	90
25–30	10 → 60	90 → 40

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Хлорамбуцил – 1 (около 12 мин); примесь В – около 0,5; примесь Е – около 1,4.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей В и Е используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу хлорамбуцила для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси В и хлорамбуцила должно быть не менее 5,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика примеси В не должна более чем в 4 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4 %);

— площадь пика примеси Е не должна более чем в 6 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

Вода. Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. Не более 0,05 % (ОФС «Сульфаты», метод 1). К 0,3 г субстанции прибавляют 15 мл воды, встряхивают до растворения и фильтруют.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,3 г (точная навеска) субстанции в 25 мл предварительно нейтрализованного спирта 96 % и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида до появления розового окрашивания (индикатор – 0,1 мл фенолфталеина раствора 1 %).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 30,42 мг хлорамбуцила C₁₄H₁₉Cl₂NO₂.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.