ФС.2.1.0425. Инозин пранобекс
утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377
Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Инозин пранобекс | ФС.2.1.0425 |
Инозин пранобекс | |
Inosinum pranobexum | Вводится впервые |
|
|
C10H12N4O5·(C14H22N2O4)3 |
М.м. 1115,3 |
[36703-88-5] |
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
9-(β-D-Рибофуранозил)-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она и 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия (1:3).
Cодержит не менее 22,8 % и не более 25,2 % инозина C10H12N4O5 и не менее 72,2 % и не более 79,8 % 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия C14H22N2O4 в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим или практически нерастворим в метаноле.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ВЭЖХ. Время удерживания двух основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пиков инозина и 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора (раздел «Количественное определение»).
2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,15 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.
Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 300 нм должен иметь максимум при 261 нм.
ИСПЫТАНИЯ
Прозрачность раствора. Раствор 10 г субстанции в 100 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности )жидкостей»).
рН раствора. От 6,0 до 7,0 (10 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,65 г дикалия гидрофосфата в 800 мл воды, доводят значение рН фосфорной кислотой концентрированной до 2,5, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.
Подвижная фаза Б(ПФБ). Метанол.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 100 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси 1. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 1, растворяют в 4 мл аммиака раствора 4 % и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 2, растворяют в 10 мл метанола и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 2 и 1,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в 50 мл воды, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 4,4 мг фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.
Примечание
Примесь 1: 1,7-дигидро-6Н-пурин-6-он [68-94-0].
Примесь 2: 4-аминобензойная кислоты [150-13-0].
Хроматографические условия
Колонка | 250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, деактивированный по отношению коснованиям, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм; |
Температура колонки | 25 °С; |
Скорость потока | 0,7 мл/мин; |
Детектор | спектрофотометрический, 254 нм; |
Объём пробы | 20 мкл. |
Режим хроматографирования
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Инозин – 1 (около 6 мин); примесь 1 – около 0,9; примесь 2 – около 1,9; 4-ацетамидобензойная кислота – около 3.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примеси 1 и примеси 2 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-ацетамидобензойной кислоты должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками инозина и гипоксантина должно быть не менее 2,0.
На хроматограмме стандартного раствора фактор асимметрии пика (AS) примеси 1, 4-ацетамидобензойной кислоты и примеси 2 должен быть не более 1,5;
Содержание примеси 1 в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где | S1 | — | площадь пика гипоксантина на хроматограмме испытуемого раствора; |
S0 | — | площадь пика гипоксантина на хроматограмме стандартного раствора; | |
a0 | — | навеска фармакопейного стандартного образца гипоксантина, мг; | |
a1 | — | навеска субстанции, мг; | |
P | — | содержание гипоксантина в фармакопейном стандартном образце гипоксантина, %; | |
0,24 | — | массовая доля инозина в субстанции. |
Содержание примеси 2 в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где | S1 | — | площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора; |
S0 | — | площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора; | |
a0 | — | навеска стандартного образца 4-аминобензойной кислоты, мг; | |
a1 | — | навеска субстанции, мг; | |
P | — | содержание4-аминобензойной кислоты в стандартном образце4-аминобензойной кислоты, %; | |
0,48 | — | массовая доля 4-ацетамидобензойной кислоты в субстанции. |
Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где | S1 | — | площадь пика любой неидентифицированной примеси на хроматограмме испытуемого раствора; |
S0 | — | площадь пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора; | |
a0 | — | навеска стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, мг; | |
a1 | — | навеска субстанции, мг; | |
P | — | содержание 4-ацетамидобензойной кислоты в стандартном образце 4-ацетамидобензойной кислоты, %. |
Допустимое содержание примесей:
— примесь 1 – не более 0,2 %;
— примесь 2 – не более 0,2 %;
— любая другая примесь – не более 0,1 %;
— сумма примесей – не более 0,5 %.
Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,025 %).
Вода. Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %.Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы»(метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
1. Инозин и 4-ацетамидобензойная кислота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза (ПФ). Смешивают 800 мл воды, 6,8 мл фосфорной кислоты концентрированной и 50 мл метанола. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл, помещают в ледяную баню, доводят значение рН натрия гидроксида раствором 5 М до 7,0 и доводят объём раствора водой до метки.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём ПФ до метки.
Раствор стандартного образца инозина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 60 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 120 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца инозина и 5,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25,0 мл полученного раствора и доводят объём ПФ до метки.
Хроматографические условия
Колонка | 250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 10 мкм; |
Температура колонки | 25 °С; |
Скорость потока | 1,0 мл/мин; |
Детектор | спектрофотометрический, 254 нм; |
Объём пробы | 20 мкл; |
Время хроматографирования | 2,5-кратное от времени удерживания пика 4-ацетамидобензойной кислоты. |
Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. 4-ацетамидобензойная кислота – около 8 мин; инозин – около 13 мин.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
— разрешение (RS) между пиками 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должно быть не менее 3,0;
— фактор асимметрии пика (AS) 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должен быть не более 2,0.
Содержание 4-ацетамидобензойной кислоты C9H9NO3 и инозина C10H12N4O5 в субстанции в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество в процентах () вычисляют по формуле:
где |
S1 |
– | площадь пика инозинаили 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора; |
S0 |
– | площадь пика инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора; | |
а1 |
– | навеска субстанции, мг; | |
а0 |
– | навеска фармакопейного стандартного образца инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты, мг; | |
P |
– | содержание инозина в фармакопейном стандартном образце инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты в фармакопейном стандартном образце ацетамидобензойной кислоты, %; | |
W |
– | суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %. |
2. N,N-диметиламино-2-пропанол. Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 40 мл воды и титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 10,317 мг N,N-диметиламино-2-пропанола C5H13NO.
ХРАНЕНИЕ
В защищённом от света месте.