ФС.2.5.0118. Леспедецы двухцветной побеги
утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 г. N 120
Дата введения в действие: c 13.03.2024 г.
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Леспедецы двухцветной побеги | ФС.2.5.0118 |
Lespedezae bicolоris cormi | Взамен ВФС 42-1942-89 |
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные в фазу цветения и высушенные побеги дикорастущего многолетнего кустарника леспедецы двухцветной – Lespedeza bicolor Turcz., сем. бобовых – Fabaceae.
Содержит не менее 0,25 % суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-глюкозид в сухом сырье.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Травы».
Цельное сырьё. Верхушки побегов длиной до 30 см, цельные или частично измельчённые листья, бутоны, цветки и незрелые плоды. Стебли округлые, с неясными рёбрами, опушённые прижатыми белыми волосками или голые. Листья длинночерешковые, тройчатые, с мелкими шиловидными прилистниками. Листочки овальные, эллиптические или яйцевидные с коротким шипиком, иногда с выемкой на верхушке, цельнокрайние, длиной до 7 см, шириной до 5 см. Соцветие – метёлка из раскидистых негустых кистей. Цветки мотылькового типа, цветоносы опушённые. Чашечка короткоопушённая, длиной до 4 мм, с 4 долями. Венчик длиной около 10 мм. Плод – боб, длиной до 10 мм, плоский, односемянный, с сетью выступающих жилок.
Цвет стеблей желтовато-зелёный, листьев – сверху зелёный, снизу серовато-зелёный, венчик розовато-фиолетовый с тёмно-фиолетовым концом. Запах слабый, характерный.
Измельчённое сырьё. Смесь кусочков листьев, стеблей, соцветий, незрелых плодов различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм.
Цвет желтовато-зелёный, серовато-зелёный с розовато-фиолетовыми или тёмно-фиолетовыми вкраплениями. Запах слабый, характерный.
Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».
Цельное сырьё, измельчённое сырьё. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны многоугольные клетки верхнего эпидермиса с прямыми или слабоизвилистыми стенками, нижнего – с извилистыми стенками. Устьица овальные, окружены 4–5 (реже 2–3) клетками эпидермиса (аномоцитный, реже парацитный тип), преобладают на нижней стороне листа. Волоски немногочисленные, преимущественно по жилкам, в большем числе на нижней стороне. Преобладают простые двухклеточные волоски с гладкой поверхностью, состоящие из округлой базальной клетки и верхней длинной терминальной клетки с утолщёнными стенками и широкой полостью. Редко встречаются простые многоклеточные волоски с удлинёнными или укороченными клетками, иногда с зеленовато-коричневым содержимым, и головчатые с одноклеточной головкой на одно-трёхклеточной ножке. Клетки эпидермиса в местах прикрепления двухклеточных волосков расположены радиально и образуют розетку. Заметны валики – места прикрепления опавших волосков. Главная и крупные боковые жилки имеют кристаллоносную обкладку из призматических кристаллов оксалата кальция и тяжи механических волокон. Губчатая паренхима листа представлена аэренхимой. В губчатой паренхиме листа встречаются секреторные ходы с жёлто-коричневым содержимым.
Рисунок 1 – Леспедецы двухцветной побеги
1 – верхний эпидермис листа с простыми волосками (40×); 2 – нижний эпидермис листа с устьицами аномоцитного типа (200×); 3 – нижний эпидермис листа с простым волоском (200×); 4 – место прикрепления волоска (200×); 5 – кристаллоносная обкладка и кристаллический песок вдоль жилки листа (40×); 6 – призматические кристаллы оксалата кальция (200×); 7 – секреторные ходы (200×).
Определение основных групп биологически активных веществ
Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
Подвижная фаза (ПФ). Этилацетат—уксусная кислота ледяная—вода 10:2:2.
Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. В коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл помещают 1,0 г измельчённого сырья, прибавляют 10 мл спирта 70 % и настаивают в течение 24 ч, после чего фильтруют через беззольный фильтр. Фильтрат упаривают на водяной бане до объёма около 1 мл.
Раствор лютеолина-7-глюкозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10 мг лютеолина-7-глюкозида, высушенного до постоянной массы, растворяют в спирте 70 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Реактив для детектирования. Алюминия хлорида раствор 5 % в спирте 70 %.
На линию старта пластинки наносят 20 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора лютеолина-7-глюкозида. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Хроматограмму опрыскивают реактивом для детектирования, нагревают при температуре 100–105 °С в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.
Результат
На хроматограмме раствора лютеолина-7-глюкозида должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией жёлто-коричневого цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флуоресценцией жёлтого цвета, выше две зоны адсорбции с флуоресценцией желтовато-коричневого цвета, над ними зона адсорбции с флуоресценцией желтовато-коричневого цвета на уровне зоны адсорбции лютеолина-7-глюкозида; допускается обнаружение других зон адсорбции.
ИСПЫТАНИЯ
Влажность. Не более 11,0 % (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).
Зола общая. Не более 7,0 % (ОФС «Зола общая»).
Измельчённость сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Измельчённое сырьё: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм — не более 20 %.
Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Стебли толще 3 мм. Цельное сырьё – не более 10 %.
Органическая примесь. Не более 1,5 %.
Минеральная примесь. Не более 0,5 %.
Тяжёлые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Заражённость вредителями запасов. В соответствии с ОФС «Определение степени заражённости лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Приготовление хроматографической колонки. В стеклянную колонку диаметром 2 см и высотой 50 см с пористым фильтром № 2 помещают ватный тампон, пропитанный водой, после чего помещают 3,0 г полиамида 6 порошка. Промывают колонку водой, оставляя слой воды высотой 3 см.
Растворитель. Вода—1,4-диоксан 1:1.
Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. В колбу вместимостью 500 мл помещают 3,0 г (точная навеска) измельчённого сырья, прибавляют 300 мл спирта 96 % и экстрагируют при постоянном перемешивании с помощью магнитной мешалки в течение 3 ч. Полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр в колбу вместимостью 500 мл, отбрасывая первые 5 мл. В круглодонную колбу вместимостью 50 мл переносят 10 мл фильтрата, прибавляют 10 мл натрия хлорида раствора 5 %, упаривают до 1/4 первоначального объёма на водяной бане при температуре 80 °С под вакуумом и охлаждают. Охлаждённый остаток количественно переносят на колонку с полиамидным сорбентом, фильтруя его через воронку с небольшим ватным тампоном. Остаток упаренного извлечения смывают со стенок колбы 20 мл воды, предназначенной для промывания колонки. Колонку промывают 80 мл воды со скоростью элюирования не более 4 мл/мин. Водный элюат отбрасывают. По окончании промывки колонки водой уровень жидкости не должен превышать уровня ватного тампона. Затем колонку промывают с той же скоростью 100 мл спирта 70 %, отбрасывая первые 10 мл элюата, последующий элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём элюата спиртом 70 % до метки.
Раствор стандартного образца лютеолина-7-глюкозида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,04 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца лютеолина-7-глюкозида, растворяют в растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца лютеолина-7-глюкозида, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора спиртом 70 % до метки.
Раствор сравнения. Промывают подготовленную колонку с полиамида 6 порошком 100 мл воды со скоростью не более 4 мл/мин, водный элюат отбрасывают. Колонку промывают 100 мл спирта 70 %, отбрасывая первые 10 мл, а последующий элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объём раствора спиртом 70 % до метки.
Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца лютеолина-7-глюкозида на спектрофотометре при длине волны 354 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.
Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-глюкозид в сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где |
A |
– |
оптическая плотность испытуемого раствора; |
A0 |
– | оптическая плотность раствора стандартного образца лютеолина-7-глюкозида; | |
а |
– | навеска сырья, г; | |
а0 |
– |
навеска фармакопейного стандартного образца лютеолина-7-глюкозида, г; |
|
P |
– |
содержание лютеолин-7-глюкозида в фармакопейном стандартном образце лютеолин-7-глюкозида, %; |
|
W |
– | влажность сырья, %. |
УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА
В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
ХРАНЕНИЕ
В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».