ФС.2.1.0459. Мелатонин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Мелатонин	ФС.2.1.0459
Мелатонин
Melatoninum	Вводится впервые

 

C13H16N2O2	М.м. 232,28
[73-31-4]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

N-[2-(5-Метокси-1H-индол-3-ил)этил]ацетамид.

Содержит не менее 98,0 % и не более 101,5 % мелатонина C₁₃H₁₆N₂O₂, в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в метаноле, умеренно растворим в хлороформе и этилацетате, мало или очень мало растворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца мелатонина.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика мелатонина на хроматограмме раствора стандартного образца мелатонина (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления. От 116 до 119 °C (ОФС «Температура плавления», метод 1).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,45 г калия дигидрофосфата в 900 мл воды и доводят значение рН фосфорной кислотой разведённой 10 % до 3,0, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель (А). Ацетонитрил ―Вода 200:800.

Растворитель (Б). ПФБ―ПФА 200:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе А и доводят объём раствора этим же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем А до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца мелатонина и 50 мг (точная навеска) примеси 5-метокситриптамина, растворяют в растворителе А и доводят объём раствора этим же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем А до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем А до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и доводят объём раствора растворителем А до метки.

Примечание

Примесь 1: 5-метокситриптамин: 2-(5-метокси-1H-индол-3-ил)этан-1-амин [608-07-1].

Хроматографические условия.

Колонка	50 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный для хроматографии, 1,8 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 225 нм;
Объём пробы	10 мкл;
Время регистрации хроматограммы	36 мин.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–20	90 → 70	10 → 30
20–36	70 → 30	30 → 70
36–41	30 → 90	70 → 10

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Мелатонин – 1 (около 7 мин); примесь 1 – около 0,3.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси 1 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствор для  проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

— отношение сигнал/шум (S/N) для пиков мелатонина и примеси 1 должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

— разрешение (R_S) между пиками 5-метокситриптамина и мелатонина должно быть не менее 10,0;

— фактор асимметрии пика (A_S) мелатонина должен быть не более 2,0.

Содержание 5-метокситриптамина в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где		—	площадь пика 5-метокситриптамина на хроматограмме испытуемого раствора;
		—	площадь пика 5-метокситриптамина на хроматограмме стандартного раствора;
		—	навеска субстанции, мг;
		—	навеска стандартного образца 5-метокситриптамина, мг;
		—	содержание 5-метокситриптамина в стандартном образце 5-метокситриптамина, %.

Содержание любой другой примеси в субстанции (X_i) в процентах вычисляют по формуле:

где		—	площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
		—	площадь пика мелатонина на хроматограмме стандартного раствора;
		—	навеска субстанции, мг;
		—	навеска стандартного образца мелатонина, мг;
		—	содержание мелатонина в стандартном образце мелатонина, %

Допустимое содержание примесей:

— примесь 1 – не более 0,15 %;

— любая другая примесь – не более 0,10 %;

— сумма всех примесей – не более 0,5 %.

Не учитывают пики, содержание каждой из которых менее 0,05 %.

Вода. Не более 0,3 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1  г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями:

Подвижная фаза (ПФ). ПФБ—ПФА 200:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе Б и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем Б до метки.

Раствор стандартного образца мелатонина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца мелатонина, растворяют в растворителе Б и доводят объём раствора этим же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем Б до метки.

Объём вводимой пробы в хроматографическую систему – 5 мкл.

Хроматографируют раствор стандартного образца мелатонина и испытуемый раствор.

Время хроматографирования: двукратное от времени удерживания пика мелатонина (около 2 мин).

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца мелатонина фактор асимметрии пика (A_S) мелатонина должен быть не более 2,0;

Содержание мелатонина C₁₃H₁₆N₂O₂ в субстанции в процентах в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (X) вычисляют по формуле:

где	S1	—	площадь пика мелатонина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	—	площадь пика мелатонина на хроматограмме раствора стандартного образца мелатонина;
		—	навеска субстанции, мг;
		—	навеска стандартного образца мелатонина, мг;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции,  %;
	P	—	содержание мелатонина в стандартном образце мелатонина, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте.