ОФС.1.2.3.0035. Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах	ОФС.1.2.3.0035
	Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на определение уксусной кислоты в лекарственных средствах синтетических пептидов.

Область применения

Испытание проводят для установления количественного содержания уксусной кислоты в синтетических пептидах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Методика

Приготовление растворов

Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,7 мл фосфорной кислоты концентрированной. Доводят объём раствора водой до метки и перемешивают. Значение рН полученного раствора доводят до 3,00 натрия гидроксида раствором концентрированным.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол.

Растворитель. ПФБ—ПФА 5:95.

Испытуемый раствор. Готовят, как указано в фармакопейной статье.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мл растворителя, прибавляют 10 мг (точная навеска) стандартного образца уксусной кислоты ледяной, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (0,1 мг/мл).

Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

— фактор асимметрии пика (A_S) пика уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение (RSD) площади пика уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора должно быть не более 2,0 % (6 введений);

— эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора, должна быть не менее 500 теоретических тарелок.

Условия хроматографирования

Колонка	250 мм × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии (С18), 5 мкм
Скорость потока, мл/мин	1,2
Температура колонки, °С	25
Детектор	спектрофотометрический
Длина волны, нм	210
Объём вводимой пробы, мкл	10

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФ А, об.%	ПФ Б, об.%
0–5	95	5
5–10	95 → 50	5 → 50
10–20	50	50
20–22	50 → 95	50 → 5
22–30	95	5

Время удерживания уксусной кислоты около 3-4 мин. Базовая линия представляет собой крутой подъём в начале линейного градиента, который соответствует выходу пептидов из колонки.

Хроматографируют испытуемый и стандартный растворы.

Содержание уксусной кислоты в лекарственных средствах в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S	–	площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
		–	концентрация испытуемого раствора, мг/мл;
	С0	–	концентрация уксусной кислоты в стандартном растворе, мг/мл.