ФС.2.1.0580. Такролимус моногидрат

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Такролимус моногидрат	ФС.2.1.0580
Такролимус
Tacrolimusum monohydricum	Вводится впервые

 

C44H69NO12·H2O	М.м. 822,03 М.м. 804,02 (безводный)
[109581-93-3]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-5,19-Дигидрокси-3-{(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-гидрокси-3-метоксициклогексил]проп-1-ен-2-ил}-4,10,12,18-тетраметил-14,16-диметокси-8-(проп-2-ен-1-ил)-3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a-октадекагидро-7H-15,19-эпоксипиридо[2,1-c][1,4]оксаазациклотрикозин-1,7,20,21(23H)-тетраон моногидрат.

Представляет собой вещество, полученное путём роста определённых штаммов Streptomyces tsukubaensis.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 102,0 % такролимуса C₄₄H₆₉NO₁₂ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в спирте 96 %. Практически нерастворим в воде и гептане.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см–1по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца такролимуса моногидрата.

2. ВЭЖХ. Время удерживания пика основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика такролимуса на хроматограмме раствора стандартного образца такролимуса моногидрата (раздел «количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 0,2 г субстанции в 20,0 мл спирта 96 % должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном GY₇ (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы, содержащие такролимус, защищают от света и перед использованием выдерживают в течение 3 ч при комнатной температуре.

Раствор А. трет-Бутилметиловый эфир—ацетонитрил 19:81.

Раствор Б. К 1000 мл воды прибавляют 0,4 мл фосфорной кислоты концентрированной и перемешивают.

Подвижная фаза А (ПФА). Раствор А—раствор Б 200:800.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Раствор Б—раствор А 200:800.

Растворитель. Вода—ацетонитрил 30:70.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 30 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. Растворяют 3,0 мг фармакопейного стандартного образца такролимуса для проверки пригодности системы (содержит примесь А) в 1,0 мл растворителя.

Примечание

Примесь A: (3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-5,19-дигидрокси-3-{(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-гидрокси-3-метоксициклогексил]проп-1-ен-2-ил}-4,10,12,18-тетраметил-14,16-диметокси-8-этил-3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a-октадекагидро-7H-15,19-эпоксипиридо[2,1-c][1,4]оксаазациклотрикозин-1,7,20,21(23H)-тетраон [104987-12-4].

Примесь B: (3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15S,16S,18R,19R,26aS)-5,19-дигидрокси-3-{(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-гидрокси-3-метоксициклогексил]проп-1-ен-2-ил}-4,10,12,18-тетраметил-14,16-диметокси-8-этил-3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a-октадекагидро-7H-15,19-эпоксипиридо[2,1-c][1,4]оксаазациклотрикозин-1,7,20,21(23H)-тетраон.

Такролимуса таутомер 1: (3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,26aS)-5,15-дигидрокси-3-{(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-гидрокси-3-метоксициклогексил]проп-1-ен-2-ил}-4,10,12,18-тетраметил-14,16-диметокси-8-(проп-2-ен-1-ил)-3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a-октадекагидро-7H-пиридо[2,1-c][1,4]оксаазациклотрикозин-1,7,19,20,21(23H)-пентаон.

Такролимуса таутомер 2: (3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19S,26aS)-5,19-дигидрокси-3-{(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-гидрокси-3-метоксициклогексил]проп-1-ен-2-ил}-4,10,12,18-тетраметил-14,16-диметокси-8-(проп-2-ен-1-ил)-3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a-октадекагидро-7H-15,19-эпоксипиридо[2,1-c][1,4]оксаазациклотрикозин-1,7,20,21(23H)-тетраон [144490-63-1].

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный для хроматографии, 3 мкм;
Температура колонки	60 °С;
Температура образца	4 °С;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–30	72	28
30–53	72 → 15	28 → 85

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Такролимус – 1 (около 24 мин); такролимуса таутомер 1 (широкий пик) – около 0,5; примесь B (острый пик) – около 0,5; такролимуса таутомер 2 – около 0,6; примесь A – около 0,9.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси А используют хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу такролимуса для проверки пригодности системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси A и такролимуса должно быть не менее 3,0.

Интегрирование: пик примеси В, элюируемый вместе с такролимуса таутомером 1, является пиком-наездником и поэтому должен интегрироваться методом тангенциальной касательной. Важно, чтобы интегрируемая площадь пика такролимуса таутомера 1 сохраняла Гауссову форму.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика примеси A не должна превышать пятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать 1,5-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0 %).

Не учитывают пики такролимуса таутомеров 1 и 2 и пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

Вода. От 1,5 % до 4,0 %. (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,25 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б), в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца такролимуса моногидрата. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 30 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца такролимуса моногидрата, растворяют в растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца такролимуса моногидрата и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца такролимуса моногидрата относительное стандартное отклонение площади пика такролимуса должно быть не более 2,0 % (6 определений).

Содержание такролимуса C₄₄H₆₉NO₁₂ в субстанции в процентах (X) в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где	S1	–	сумма площадей пиков такролимуса и такролимуса таутомеров 1 и 2 на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	сумма площадей пиков такролимуса и такролимуса таутомеров 1 и 2 на хроматограмме раствора стандартного образца такролимуса моногидрата;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца такролимуса моногидрата, мг;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
	P	–	содержание такролимуса в фармакопейном стандартном образце такролимуса моногидрата, %.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке.