ОФС.1.2.2.2.0018. 4-Аминофенол

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

4-Аминофенол	ОФС.1.2.2.2.0018
	Вводится впервые

Метод определения 4-аминофенола в лекарственных средствах, содержащих парацетамол, основан на использовании ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы, содержащие парацетамол или 4-аминофенол, защищают от света и используют свежеприготовленными.

Методика 1

Буферный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 4,0 г натрия цитрата и 1,5 г лимонной кислоты безводной, растворяют в воде и доводят объём тем же растворителем до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,60 г калия дигидрофосфата и 0,82 г динатрия гидрофосфата безводного.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Вода.

Подвижная фаза В (ПФВ). Ацетонитрил.

Растворитель. Ацетонитрил—буферный раствор 10:90.

Испытуемый раствор А. Готовят раствор субстанции или препарата в растворителе с концентрацией парацетамола 10 мг/мл и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мл испытуемого раствора А, доводят объём раствора растворителем до метки и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор стандартного образца 4-аминофенола. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают около 5 мг (точная навеска) стандартного образца 4-аминофенола, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл раствора стандартного образца 4-аминофенола и доводят объём раствора растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мл испытуемого раствора А и 15 мл раствора стандартного образца 4-аминофенола, доводят объём раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм, сорбент комбинированный для ВЭЖХ, 5 мкм;
Температура колонки	30 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 300 нм;
Объём пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %	ПФВ, %
0–7	90	5	5
7–7,1	90 → 10	5 → 10	5 → 80
7,1–10	10 → 90	10 → 5	80 → 5
10–15	90	5	5

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор Б.

Время удерживания 4-аминофенола – около 5 мин.

Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-аминофенола должно быть не менее 20.

На хроматограмме стандартного раствора:

— разрешение (R_S) между пиками 4-аминофенола и ближайшим к нему должно быть не менее 1;

—  фактор асимметрии пика (A_S) 4-аминофенола должен быть не более 1,5;

— относительное стандартное отклонение площади пика 4-аминофенола должно быть не более 5,0 % (6 введений).

Содержание 4-аминофенола С₆Н₇NO в субстанции или препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме стандартного раствора;
	a0	–	навеска стандартного образца 4-аминофенола, мг;
	P	–	содержание 4-аминофенола в стандартном образце 4-аминофенола, %.

Допустимое содержание 4-аминофенола: Не более 0,15 % по отношению к парацетамолу, если в фармакопейной статье не указано иначе.

Настройка хроматографической системы. При необходимости, время удерживания 4-аминофенола может быть уменьшено или увеличено в соответствии с таблицей:

Изменение во времени удерживания 4-аминофенола:	Изменение условий хроматографирования:
Уменьшение:	Увеличение доли ПФВ
	Уменьшение доли ПФБ
	Увеличение доли ПФА
Увеличение:	Понижение рН ПФА
	Увеличение температуры колонки

Методика 2

Подвижная фаза. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,6 г натрия бутансульфоната, растворяют в смеси муравьиная кислота—метанол—вода 4:150:850 и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Растворитель. Метанол—вода 15:85.

Испытуемый раствор. Готовят раствор субстанции или препарата в растворителе с концентрацией парацетамола 10 мг/мл и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор стандартного образца 4-аминофенола. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 10 мг (точная навеска) стандартного образца 4-аминофенола, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г стандартного образца парацетамола и доводят объём раствором стандартного образца 4-аминофенола до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора для проверки пригодности хроматографической системы и доводят объём растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	1,4 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 272 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца 4-аминофенола.

Время удерживания соединений. Парацетамол — около 6 мин; 4-аминофенол — около 3 мин.

Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-аминофенола должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

— разрешение (R_S) между пиками 4-аминофенола и парацетамола должно быть не менее 5;

—  фактор асимметрии пика (A_S) 4-аминофенола должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение площади пика 4-аминофенола должно быть не более 5,0 % (6 введений);

— эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику 4-аминофенола, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание 4-аминофенола С₆Н₇NO в субстанции или препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме раствора стандартного образца 4-аминофенола;
	a0	–	навеска стандартного образца 4-аминофенола, мг;
	P	–	содержание 4-аминофенола в стандартном образце 4-аминофенола, %.

Допустимое содержание 4-аминофенола: Не более 0,01 % по отношению к парацетамолу, если в фармакопейной статье не указано иначе.