ФС.2.1.0337. Аргинин
утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377
Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
| Аргинин | ФС.2.1.0337 |
| Аргинин | |
| Argininum | Вводится впервые |
|
|
|
| C6H14N4O2 |
М.м. 174,20 |
| [74-79-3] |
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(2S)-2-Амино-5-(карбамимидоиламино)пентановая кислота.
L-Аргинин.
Cодержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % аргинина C6H14N4O2 в пересчёте на сухое вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.
*Гигроскопичен.
Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим в спирте 96 % , практически нерастворим в хлороформе.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см–1, по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца аргинина.
Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец высушивают при температуре 105 °С и записывают спектры сухих остатков.
2. ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»). Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора Б по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции аргинина на хроматограмме раствора стандартного образца аргинина (раздел «Родственные примеси. 1. Аминосоединения»).
3. Качественная реакция. Растворяют 25 мг субстанции в 2 мл воды, прибавляют 1 мл α-нафтола раствора 0,1 % и 2 мл смеси, состоящей из натрия гипохлорита раствора концентрированного и воды (1:1); должно появиться красное окрашивание.
ИСПЫТАНИЯ
Удельное вращение. От +25,5 до +28,5 в пересчёте на сухое вещество (8 % раствор субстанции в хлористоводородной кислоте 25 %, ОФС «Оптическое вращение»).
Прозрачность раствора. Раствор 0,5 г субстанции в 10 мл воды дистиллированной должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY6 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
рН раствора. От 10,5 до 12,0 (5 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси
1. Аминосоединения. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
Подвижная фаза (ПФ). Аммиака раствор концентрированный 25 %—2-пропанол 30:70.
Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоте разведённой 7,3 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца аргинина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца аргинина, растворяют в хлористоводородной кислоте растворе 0,1 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл раствора сравнения А и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10 мг стандартного образца аргинина и 10 мг стандартного образца лизина гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоте растворе 0,1 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора А (50 мкг), испытуемого раствора Б (1 мкг), раствора стандартного образца аргинина (1 мкг), раствора сравнения А (0,25 мкг), раствора сравнения Б (0,1 мкг), раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (по 2 мкг аргинина и лизина гидрохлорида) и хлористоводородной кислоты разведённой 7,3 %. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, в течение 10 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом.
Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей при температуре 100–105 °С, опрыскивают нингидрина раствором 0,2 %, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100–105 °С в течение 15 мин и просматривают в видимом свете.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должна обнаруживаться чёткая зона адсорбции.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы должны обнаруживаться 2 разделённые зоны адсорбции.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции любой примеси по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции аргинина на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,5 %).
Суммарное содержание примесей, оцененное по совокупности величины и интенсивности окраски их зон адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора в сравнении с зонами адсорбции на хроматограммах растворов сравнения не должно превышать 2,0 %.
Зону адсорбции хлористоводородной кислоты разведённой 7,3 % не учитывают.
2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными.
Фосфорной кислоты раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мл фосфорной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до метки.
Модифицирующий реактив. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл водорода пероксида и доводят объём раствора водой до метки.
Подвижная фаза (ПФ). Растворяют 2,4 г натрия дигидрофосфата безводного и 1,9 г натрия гексансульфоната в 965 мл воды, доводят значение рН фосфорной кислотой концентрированной до 2,30±0,05, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора ацетонитрилом до метки.
Испытуемый раствор. Растворяют 20 мг субстанции в смеси 1 мл фосфорной кислоты раствора и 9 мл ПФ, при необходимости обрабатывают ультразвуком до растворения и охлаждают до комнатной температуры.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 20 мг субстанции, прибавляют 10 мл модифицирующего реактива, выдерживают в течение 2 ч при температуре 80 °С, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 6,0 мл раствора сравнения и доводят объём раствора ПФ до метки.
Хроматографические условия
| Колонка | 100 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 2,6 мкм; |
| Температура колонки | 25 °С; |
| Скорость потока | 1,0 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 195 нм; |
| Объём пробы | 5 мкл; |
| Время хроматографирования | 1,5-кратное от времени удерживания пика аргинина. |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Время удерживания аргинина – около 7,5 мин.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика аргинина должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси с относительным временем удерживания 0,85 и аргинина должно быть не менее 3,0.
На хроматограмме раствора сравнения относительное стандартное отклонение площади пика аргинина должно быть не более 2,0 % (6 введений).
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
— площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика аргинина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,05 %);
— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать трёхкратную площадь пика аргинина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15 %).
Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика аргинина на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,03 %).
Аммоний. Не более 0,02 %.
Стандартный раствор аммония. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 74,1 мг (точная навеска) аммония хлорида, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл полученного раствора. Раствор готовится непосредственно перед использованием.
Испытуемый раствор. В коническую колбу с притёртой пробкой вместимостью 25 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в 1 мл воды, прибавляют 0,3 г магния оксида и перемешивают.
Эталонный раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,1 мл стандартного раствора аммония, прибавляют 1 мл воды, 0,3 г магния оксида и перемешивают.
Над реакционными смесями испытуемого и эталонного растворов подвешивают по полоске полиэтилена шириной 1 см с прикреплёнными несколькими каплями воды отрезками серебряно-марганцевой бумаги, и закрывают колбы пробками. Содержимое колб перемешивают, не допуская попадания брызг на бумагу, и выдерживают на водяной бане при температуре 40 °С в течение 30 мин. Окраска бумаги, используемой в испытуемом растворе, не должна быть интенсивнее окраски бумаги, используемой в эталонном растворе.
Железо. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Железо» (метод 1) в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции (ОФС «Сульфатная зола») с использованием стандартного раствора железо(III)-иона 10 мкг/мл.
Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Сульфаты. Не более 0,03 %. (ОФС «Сульфаты», метод 1). В 10 мл воды растворяют 0,33 г субстанции.
Хлориды. Не более 0,02 % (ОФС «Хлориды»). В 10 мл воды растворяют 0,1 г субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) с использованием эталонного раствора 1.
*Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза – 11 мг субстанции в 0,5 мл раствора натрия хлорида для инъекций 0,9 % на мышь, внутривенно, со скоростью 0,1 мл/с. Срок наблюдения – 48 часов.
*Бактериальные эндотоксины. Не более 10,0 ЕЭ на 1 г аргинина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией аргинина 45 мг/мл в хлористоводородной кислоты растворе 0,25 М, приготовленном на воде для определения бактериальных эндотоксинов. Коррекцию pH исходного раствора субстанции осуществляют с использованием буферных растворов.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
Растворяют 0,15 г (точная навеска) субстанции в 50 мл воды и титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты до перехода окраски из зелёной в фиолетово-красную (индикатор – 0,2 мл метилового красного смешанного раствора).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 17,42 мг аргинина C6H14N4O2.
ХРАНЕНИЕ
В герметично укупоренной упаковке, защищённом от света месте.
*Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.