ФС.2.1.0672. Гидрокортизон

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 г. № 120

Дата введения в действие: c 13.03.2024 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Гидрокортизон	ФС.2.1.0672
Гидрокортизон
Hydrocortisonum	Вводится впервые

 

C21H30O5	М.м. 362,46
[50-23-7]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

11β,17,21-Тригидроксипрегн-4-ен-3,20-дион.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 103,0 % гидрокортизона C₂₁H₃₀O₅ в пересчёте на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

*Проявляет полиморфизм.

Растворимость. Умеренно растворим в ацетоне и спирте 96 %, мало растворим в метиленхлориде, очень мало растворим или практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца гидрокортизона.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объёмах ацетона, выпаривают досуха на водяной бане и незамедлительно записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика гидрокортизона на хроматограмме раствора стандартного образца гидрокортизона (раздел «Родственные примеси»).

3. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»)

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F_254.

Подвижная фаза А (ПФА). Вода—метанол—эфир—метиленхлорид 1,2:8:15:77.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Бутанол, насыщенный водой—толуол—эфир 5:15:80.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца гидрокортизона. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца гидрокортизона, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мл раствора стандартного образца гидрокортизона и доводят объём раствора метиленхлоридом до метки.

Раствор стандартного образца Б. В стеклянную пробирку длиной 100 мм и диаметром 20 мм с подходящей стеклянной притёртой пробкой или пробкой из политетрафторэтилена помещают 0,4 мл раствора стандартного образца гидрокортизона и выпаривают растворитель при слабом нагревании в потоке азота. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведённой 15 % и 50 мг натрия висмутата, пробирку закрывают и встряхивают полученную суспензию в течение 1 ч на механическом встряхивателе, защищая раствор от света. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведённой 15 % и фильтруют в делительную воронку вместимостью 50 мл, промывая фильтр двумя порциями воды по 5 мл каждая. Прозрачный фильтрат встряхивают с 10 мл метиленхлорида. Органический слой промывают 5 мл натрия гидроксида раствором 1 М и двумя порциями воды по 5 мл каждая и высушивают с использованием натрия сульфата безводного.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора метиленхлоридом до метки.

Раствор сравнения Б. В стеклянную пробирку длиной 100 мм и диаметром 20 мм с подходящей стеклянной притёртой пробкой или пробкой из политетрафторэтилена помещают 0,4 мл испытуемого раствора и выпаривают растворитель при слабом нагревании в потоке азота. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведённой 15 % и 50 мг натрия висмутата, пробирку закрывают и встряхивают полученную суспензию в течение 1 ч на механическом встряхивателе, защищая раствор от света. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведённой 15 % и фильтруют в делительную воронку вместимостью 50 мл, промывая фильтр двумя порциями воды по 5 мл каждая. Прозрачный фильтрат встряхивают с 10 мл метиленхлорида. Органический слой промывают 5 мл натрия гидроксида раствором 1 М и двумя порциями воды по 5 мл каждая и высушивают с использованием натрия сульфата безводного.

Реактив для детектирования. Серной кислоты раствор спиртовой 36,6 %.

На линию старта пластинки наносят 5 мкл раствора сравнения А, 5 мкл раствора стандартного образца А, 25 мкл раствора сравнения Б, 25 мкл раствора стандартного образца Б. Последние два раствора наносятся малыми количествами для получения пятен небольшого размера. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФА и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФА пройдёт около 15 см длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры с ПФА и помещают в камеру с ПФБ, хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФБ пройдёт около 15 см длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей.

Просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Основные зоны адсорбции на хроматограмме растворов сравнения А и Б по положению и величине должны соответствовать зонам адсорбции гидрокортизона на хроматограмме растворов стандартных образцов А и Б.

Пластинку опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 120 °С в течение 10 мин или до появления пятен. Охлаждают и просматривают при видимом свете и в
УФ-свете при длине волны 365 нм.

Основные зоны адсорбции на хроматограмме растворов сравнения А и Б по положению, величине и окраске при видимом свете и положению, величине и интенсивности флуоресценции в УФ-свете должны соответствовать зонам адсорбции гидрокортизона на хроматограмме растворов стандартных образцов А и Б.

Пригодность хроматографической системы. Значения Rf основных зон адсорбции на хроматограмме растворов сравнения Б и стандартного образца Б заметно выше значений Rf основных зон адсорбции на хроматограмме растворов сравнения А и стандартного образца А.

4. Качественная реакция. К 2 мг субстанции прибавляют 2 мл серной кислоты концентрированной и встряхивают до растворения; в течение 5 мин должно появиться интенсивное коричнево-красное окрашивание с зелёной флуоресценцией, более интенсивной при просмотре в УФ-свете при длине волны 365 нм. Полученный раствор прибавляют к 10 мл воды и перемешивают; окраска должна измениться на более тусклую, прозрачность раствора и зелёная флуоресценция в УФ-свете сохраняются.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +162 до +168 в пересчёте на сухое вещество (ОФС «Оптическое вращение»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,2 г субстанции, растворяют в метаноле, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Вода.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Ацетонитрил—вода 400:600.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе, доводят объём раствора растворителем до метки и обрабатывают раствор ультразвуком в течение 10 мин.

Раствор стандартного образца гидрокортизона. Растворяют 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гидрокортизона в 1,0 мл растворителя и обрабатывают раствор ультразвуком в течение 10 мин.

Раствор стандартного образца гидрокортизона, содержащего примеси D, E, G, H, I и N. Растворяют 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гидрокортизона содержащего примеси D, E, G, H, I и N в 1,0 мл растворителя и обрабатывают раствор ультразвуком в течение 10 мин.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для идентификации. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 4 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца преднизолона (примесь А), 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца кортизона (примесь B), 8 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гидрокортизона ацетата (примесь C) и 6 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца
11-дезоксикортизола (примесь F), растворяют в 40 мл ацетонитрила и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 0,5 мл полученного раствора и доводят объём раствора испытуемым раствором до метки.

Примечание

Примесь А (преднизолон): 11β,17,21-тригидроксипрегна-1,4-диен-3,20-дион [50-24-8].

Примесь В (кортизон): 17,21-дигидроксипрегн-4-ен-3,11,20-трион [53-06-5].

Примесь С (гидрокортизона ацетат): (11β,17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил) ацетат [50-03-3].

Примесь D: 6β,11β,17,21-Тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион [53-35-0].

Примесь Е (6-Дегидрокортизол): 11β,17,21-тригидроксипрегна-4,6-диен-3,20-дион [600-99-7].

Примесь F(11-дезоксикортизол): 17,21-дигидроксипрегн-4-ен-3,20-дион [152-58-9].

Примесь G: 11β,17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-аль, [14760-49-7].

Примесь Н: 7α,11β,17,21-тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион.

Примесь I: 11β,14,17,21-тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион [103795-84-2].

Примесь N: 11β,17,21-тригидрокси-21-(11β,17,21-тригидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил)прегн-4-ен-3,20-дион.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, деактивированный по отношению к основаниям, эндкепированный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	0,8 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объём пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–18	74	26
18–32	74 → 55	26 → 45
32–48	55 → 30	45 → 70
48–50	74	26
50–55	74	26

Хроматографируют раствор для идентификации, раствор стандартного образца гидрокортизона, содержащего примеси D, E, G, H, I и N, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Гидрокортизон – 1 (около 24 мин); примесь D – около 0,2; примесь Н – около 0,3; примесь I – около 0,5; примесь G – около 0,8; примесь Е – около 0,86; примесь А – около 0,96; примесь В – около 1,1; примесь F – около 1,4; примесь С – около 1,5; примесь N – около 1,7.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей D, E, G, H, I и N используют хроматограмму стандартного образца гидрокортизона, содержащего примеси D, E, G, H, I и N и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу гидрокортизона. Для идентификации пиков примесей А, В, С и F используют хроматограмму раствора для идентификации.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для идентификации отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси А и гидрокортизона должно быть не менее 3,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь D – 1,8; примесь E – 2,7.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика каждой из примесей С, D, E и I не должна более чем в 5 раз превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %);

— площадь пика примеси G не должна более чем в 4 раза превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%);

— площадь пика примеси F не должна более чем в 3 раза превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3 %);

— площадь пика каждой из примесей А и В не должна превышать 2 площади пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2 %);

— площадь пика каждой из примесей Н и N не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать двадцатикратную площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0 %);

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в спирте 96 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 241,5 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют спирт 96 %.

Содержание гидрокортизона C₂₁H₃₀O₅ в субстанции в пересчёте на сухое вещество в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	A	—	оптическая плотность испытуемого раствора;
	а	—	навеска субстанции, г;
	440	—	удельный показатель поглощения гидрокортизона ();
	W	—	потеря в массе при высушивании, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте.

 

*Приводится для информации.