ФС.2.1.0515. Натамицин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Натамицин	ФС.2.1.0515
Натамицин
Natamycinum	Вводится впервые

 

C33H47NO13	М. м. 665,73
[7681-93-8]

М. м. 665,73

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-Амино-3,6-дидезокси-β-D-маннопиранозил)окси]-1,3,26-тригидрокси-12-метил-10-оксо-6,11,28-триоксатрицикло[22.3.1.05,7]октакоза-8,14,16,18,20-пентаен-25-карбоновая кислота.

Cодержит не менее 90,0 % и не более 102,0 % натамицина C₃₃H₄₇NO₁₃ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. От белого до белого с желтоватым оттенком цвета кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в диметилформамиде, растворим или мало растворим в уксусной кислоте ледяной, мало растворим в метаноле, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика натамицина на хроматограмме раствора стандартного образца натамицина (раздел «Количественное определение»).

2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Растворитель. Уксусная кислота ледяная—метанол 1:1000.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 50 мг субстанции и прибавляют 5 мл воды. Прибавляют 100 мл растворителя, встряхивают в темноте до растворения и доводят объём растворителем до метки. В мерную колбу вместимость 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объём растворителем до метки.

Раствор стандартного образца натамицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг стандартного образца натамицина и прибавляют 2,5 мл воды. Прибавляют 50 мл растворителя, встряхивают в темноте до растворения и доводят объём растворителем до метки. В мерную колбу вместимость 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объём растворителем до метки.

Спектры поглощения испытуемого раствора и раствора стандартного образца натамицина в области от 190 до 400 нм должны иметь максимумы и минимумы при одних и тех же длинах волн.

3. Качественная реакция. К 3 мг натамицина прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной; должно появиться сине-фиолетовое окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +243 до +259 в пересчёте на безводное вещество (0,4 % раствор субстанции в уксусной кислоте безводной, ОФС «Оптическое вращение»).

рН. От 5,0 до 7,5 (1 % суспензия в воде, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы, содержащие натамицин, используют свежеприготовленными и защищают от света.

Растворитель. Хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М—метанол 1:99.

Подвижная фаза (ПФ). В коническую колбу вместимостью 1500 мл помещают 3,0 г аммония ацетата и 1,0 г аммония хлорида, растворяют в 760 мл воды, прибавляют 5,0 мл тетрагидрофурана и 240 мл ацетонитрила. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Прибавляют 60 мл метанола, 25 мл воды, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора водой до метки. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в растворителе и выдерживают в течение 2 часов.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и доводят объём раствора водой до метки.

Примечание

Метиловый эфир натамицина: Метил[(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-амино-3,6-дидезокси-β-D-маннопиранозил)окси]-1,3,26-тригидрокси-12-метил-10-оксо-6,11,28-триоксатрицикло[22.3.1.05,7]октакоза-8,14,16,18,20-пентаен-25-карбонат].

Хроматографические условия

Предколонка	20 × 3,9 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	40 °С;
Скорость потока	3,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 303 нм;
Объём пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	2-кратное от времени удерживания основного вещества.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Натамицин – 1 (около 14 мин), метиловый эфир натамицина – около 1,3.

Идентификация примесей. Для идентификации пика метилового эфира натамицина используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика натамицина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

— разрешение (R) между пиками натамицина и метилового эфира натамицина должно быть не менее 2,5;

— фактор ассиметрии пика (A_S) натамицина должен быть не более 1,3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика метилового эфира натамицина не должна более чем в 2 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать четырёхкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 4,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05 %).

Вода. От 6,0 % до 9,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3А) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца натамицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца натамицина, прибавляют 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Прибавляют 60 мл метанола, 25 мл воды, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора водой до метки. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца натамицина и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца натамицина:

— фактор асимметрии пика (A_S) натамицина должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение площади пика натамицина должно быть не более 2,0 % (6 введений);

Содержание натамицина C₃₃H₄₇NO₁₃ в пересчёте на безводное и свободное от органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика натамицина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика натамицина на хроматограмме раствора стандартного образца натамицина;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца натамицина, мг;
	P	–	содержание натамицина в фармакопейном стандартном образце натамицина, %;
	W	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.