ФС.2.1.0122. Левофлоксацин гемигидрат
утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377
Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
| Левофлоксацин гемигидрат | ФС.2.1.0122 |
| Левофлоксацин | |
| Levofloxacinum hemihydricum | Взамен ФС.2.1.0122.18 |
|
|
|
| C18H20FN3O4·1/2H2O |
М.м. 370,38 |
| [138199-71-0] |
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(3S)-3-Метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота гемигидрат.
Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % левофлоксацина в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый с желтоватым оттенком кристаллический порошок.
Растворимость. Умеренно растворим в воде, растворим в уксусной кислоте, мало растворим в спирте 96 %.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области частот от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца левофлоксацина.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика левофлоксацина на хроматограмме раствора фармакопейного стандартного образца левофлоксацина (раздел «Количественное определение»).
ИСПЫТАНИЯ
Удельное вращение. От –92 до –106 в пересчёте на безводное вещество (0,5 % раствор субстанции в метаноле, ОФС «Оптическое вращение»).
Прозрачность раствора. Раствор 0,5 г субстанции в 100 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)жидкостей»).
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y5 или GY5. (ОФС «Степень окраски жидкостей»).
Родственные примеси
Энантиомерная чистота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.
Раствор А. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,32 г D-фенилаланина и 0,75 г меди(II) сульфата, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол—раствор А 150:850.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 10 мл воды и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,5 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, прибавляют 5 мг фармакопейного стандартного образца примеси Е, растворяют в 10 мл воды и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Примечание
Примесь Е: (3R)-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [100986-86-5].
Хроматографические условия
| Колонка | 150 × 4,0 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 3,5 мкм; |
| Температура колонки | 40 °С; |
| Скорость потока | 0,7 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 294 нм; |
| Объём пробы | 10 мкл; |
| Время хроматографирования | 30 мин. |
Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Левофлоксацин – 1; примесь Е – около 0,91.
Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси Е используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:
— разрешение (RS) между пиками примеси 5 и левофлоксацина должно быть не менее 2,0;
— фактор асимметрии пика (AS) левофлоксацина должен быть не более 1,5.
Допустимое содержание примесей. Содержание примеси Е в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):
— примесь Е – не более 1,0 %.
Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.
В зависимости от способа получения субстанции левофлоксацина гемигидрата и от предполагаемого наличия примесей, для определения показателя «Родственные примеси» применяют различные подходы. В случае если потенциальной примесью является примесь 3, рекомендуется использовать метод 1. Метод 2 в сочетании с определением энантиомерной чистоты рекомендуется использовать при потенциальном наличии примеси 6.
Метод 1
Раствор А. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г аммония ацетата, 1,25 г меди(II) сульфата и 1,3 г L-изолейцина, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол—раствор А 300:700.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца левофлоксацина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают около 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси Е, растворяют в растворе стандартного образца левофлоксацина и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца левофлоксацина и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,5 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.
Примечание
Примесь А: (3S)-3-метил-7-оксо-10-(пиперазин-1-ил)-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [117707-40-1].
Примесь В: (3S)-3-метил-10-{[2-(метиламино)этил]амино}-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [151250-76-9].
Примесь С: 4-{(3S)-6-марбокси-3-метил-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-10-ил}-1-метилпиперазин-1-оксид [117678-38-3].
Примесь D: (3S)-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [117620-85-6].
Примесь E: (3R)-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [100986-86-5].
Хроматографические условия
| Колонка | 250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный для хроматографии, 5 мкм; |
| Температура колонки | 45 °С; |
| Скорость потока | 0,8 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 360 нм; |
| Объём пробы | 25 мкл; |
| Время хроматографирования | 2-кратное времени удерживания пика левофлоксацина. |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца левофлоксацина и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Левофлоксацин – 1 (около 12 мин); примесь А – около 0,47; примесь В – около 0,52; примесь С – около 0,63; примесь D – около 0,73; примесь E – около 1,21.
Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси E используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Для идентификации пиков примесей А, В, С и D используют относительное время удерживания соединений.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика левофлоксацина должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками левофлоксацина и примеси Е должно быть не менее 2,0.
На хроматограмме раствора стандартного образца левофлоксацина фактор асимметрии пика (AS) левофлоксацина должен быть не менее 0,5 и не более 1,5;
Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь В – 1,1; примесь С – 0,9.
Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):
— примесь A – не более 0,3%;
— примесь B – не более 0,3%;
— примесь C – не более 0,3%;
— примесь D – не более 0,3%;
— примесь E – не более 0,8%;
— любая другая примесь – не более 0,1 %;
— сумма примесей – не более 0,5 %, не считая примесь С.
Метод 2
Буферный раствор. Растворяют 3,08 г аммония ацетата и 8,43 г натрия перхлората в 900 мл воды, доводят значение рН раствора фосфорной кислотой концентрированной до 2,2, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.
Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил—буферный раствор 160:840.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил—метанол—буферный раствор 300:200:500.
Растворитель. Ацетонитрил—вода 1:10.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 40 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 8 мл ацетонитрила, при необходимости обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца левофлоксацина А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, растворяют в 8 мл ацетонитрила, при необходимости обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор стандартного образца левофлоксацина Б. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца левофлоксацина А и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси А, растворяют в растворе аммиака 0,2 % в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси F. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси F, растворяют в метаноле, при необходимости обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора метанолом до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца левофлоксацина А, прибавляют 2,0 мл раствора стандартного образца примеси А и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца левофлоксацина Б, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси F и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора для проверки пригодности хроматографической системы и доводят объём раствора растворителем до метки.
Примечание
Примесь A: (3S)-3-метил-7-оксо-10-(пиперазин-1-ил)-9-фтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [117707-40-1].
Примесь F: (3S)-3-метил-7-оксо-9,10-дифтор-2,3-дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота [100986-89-8].
Хроматографические условия
| Колонка | 150 × 4,0 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 3,0 мкм; |
| Температура колонки | 38 °С; |
| Скорость потока | 1,0 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 280 нм; |
| Объём пробы | 10 мкл. |
Градиентное элюирование
|
Время, мин |
ПФА, % |
ПФБ, % |
|
0–5 |
100 |
0 |
|
5–10 |
100 → 82 |
0 → 18 |
|
10–15 |
82 → 40 |
18 → 60 |
|
15–30 |
40 |
60 |
|
30–30,1 |
40 → 100 |
60 → 0 |
|
30,1–38 |
100 |
0 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор проверки разделительной способности хроматографической системы и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Левофлоксацин – 1; примесь А – около 0,9; примесь F – около 2,9.
Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси А используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Для идентификации пика примеси F используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика левофлоксацина должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси А и левофлоксацина должно быть не менее 2,0.
Содержание примеси F в субстанции в процентах (
) вычисляют по формуле:
| где |
S1 |
— | площадь пика примеси F на хроматограмме испытуемого раствора; |
|
S0 |
— | площадь пика примеси F на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы; | |
|
а1 |
— | навеска субстанции, мг; | |
|
а0 |
— | навеска фармакопейного стандартного образца примеси F, мг; | |
|
P |
– | содержание примеси F в фармакопейном стандартном образце примеси F, %. |
Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:
| где |
S1 |
— | площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; |
|
S0 |
— | площадь пика левофлоксацина на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы; | |
|
а1 |
— | навеска субстанции, мг; | |
|
а0 |
— | навеска фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, мг; | |
|
P |
– | содержание левофлоксацина в фармакопейном стандартном образце левофлоксацина, %. |
Допустимое содержание примесей:
— примесь А – не более 0,2 %;
— примесь F – не более 0,13 %;
— любая другая примесь – не более 0,1 %;
— сумма примесей – не более 0,5 %.
Вода. От 2,0 % до 3,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции и, в качестве растворителя, смесь формамид—метанол 1:1.
Сульфатная зола. Не более 0,2 % (ОФС«Сульфатная зола»). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции и платиновый тигель.
Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 0,5 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».
Бактериальные эндотоксины. Не более 0,5 ЕЭ на 1 мг левофлоксацина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография») в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол—буферный раствор 300:700.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца левофлоксацина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца левофлоксацина фактор асимметрии пика (AS) левофлоксацина должен быть не менее 0,5 и не более 1,5;
Содержание левофлоксацина C18H20FN3O4 в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (
вычисляют по формуле:
| где |
S1 |
— | площадь пика левофлоксацина на хроматограмме испытуемого раствора; |
|
S0 |
— | площадь пика левофлоксацина на хроматограмме раствора стандартного образца левофлоксацина; | |
|
а1 |
— | навеска субстанции, мг; | |
|
а0 |
— | навеска фармакопейного стандартного образца левофлоксацина, мг; | |
|
Р |
— | содержание левофлоксацина в фармакопейном стандартном образце левофлоксацина, %; | |
|
W |
— | суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %. |
ХРАНЕНИЕ
В защищённом от света месте.