ФС.2.1.0442. Левосимендан

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Левосимендан	ФС.2.1.0442
Левосимендан
Levosimendanum	Вводится впервые

 

C14H12N6O	М.м. 280,28
[141505-33-1]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

N-{4-[(4R)-4-Метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}карбоногидразоноилдицианид.

Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % левосимендана C₁₄H₁₂N₆O в пересчёте на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. От жёлтого или жёлтого с зеленоватым, или жёлтого с оранжевым оттенком цвета до тёмно-жёлтого с коричневатым оттенком цвета аморфный порошок.

Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца левосимендана.

2. Спектрофотометрия (ОФС«Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 12 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в этаноле и доводят объём раствора до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл и доводят объём раствора этанолом до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 450 нм должен иметь максимумы при 383 нм и 289 нм, и минимум при 318 нм.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От –596 до –632 в пересчёте на сухое вещество (0,1 % раствор субстанции в диметилформамиде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,05 г субстанции в 20 мл этанола должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Оптическая плотность. Оптическая плотность  раствора, полученного в испытании «Прозрачность раствора», измеренная при длине волны 600 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, не должна превышать 0,3 (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,0 г натрия дигидрофосфата дигидрата в 900 мл воды, доводят значение рН раствора фосфорной кислотой концентрированной до 2,10, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Метанол—ПФА 200:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20,0 мг субстанции, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида, прибавляют 10 мл этанола и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и доводят объём раствора растворителем до метки.

Примечание

Примесь 1: (2Z)-({4-[(4R)-4-метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}гидразинилиден)-2-цианоацетамид [274263-65-9].

Примесь 2: этил[(2Z)-({4-[(4R)-4-Метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}гидразинилиден)-2-цианоацетат] [58782509].

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм, силикагель октилсилильный, деактивированный по отношению к основаниям, эндкепированный, для хроматографии, 3 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 380 нм;
Объём пробы	30 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–5	80 → 70	20 → 30
5–15	70	30
15–30	70 → 10	30 → 90

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Левосимендан – 1 (около 14 мин); примесь 1 – около 0,4; примесь 2 – около 1,1.

*Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика левосимендана должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора сравнения:

— фактор асимметрии пика (A_S) левосимендана должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение площади пика левосимендана должно быть не более 5,0 % (6 введений).

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика каждой из примесей 1 и 2 не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать пятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05 %).

Энантиомерная чистота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Буферный раствор. Растворяют 2,3 г аммония дигидрофосфата в 900 мл воды, доводят значение рН раствора фосфорной кислотой концентрированной до 3,50, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол—буферный раствор 75:925.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20,0 мг субстанции, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида и доводят объём раствора метанолом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора метанолом до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг симендана, прибавляют 10 мл диметилсульфоксида и доводят объём раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и 20 мг фармакопейного стандартного образца левосимендана, прибавляют 10 мл диметилсульфоксида и доводят объём раствора метанолом до метки.

Примечание

Декстросимендан: N-{4-[(4S)-4-метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}карбоногидразоноилдицианид [144238-75-5].

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм, силикагель модифицированный овомукоидом для хиральной хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	0,8 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 380 нм;
Объём пробы	5 мкл;
Время хроматографирования	20 мин.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Левосимендан – 1 (около 10 мин); декстросимендан – около 1,2.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) между пиками левосимендана и декстросимендана должно быть не менее 1,25.

На хроматограмме раствора сравнения:

— отношение сигнал/шум (S/N) для пика левосимендана должно быть не менее 20;

— фактор асимметрии пика (A_S) левосимендана должен быть не более 2,5;

— относительное стандартное отклонение площади пика левосимендана должно быть не более 5,0 % (6 введений).

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика декстросимендана не должна превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6 %).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 % (ОФС «Тяжёлые металлы», метод 3Б).

Бактериальные эндотоксины. Не более 16 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции  концентрацией 1 мг левосимендана в 1 мл этилового спирта 96 %, нагревают не выше 70 °С и перемешивают до полного растворения субстанции.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза (ПФ). ПФБ—ПФА 400:600.

Растворитель. Диметилсульфоксид—этанол 10:10.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца левосимендана. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца левосимендана, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Объём пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	15 мин.

Хроматографируют раствор стандартного образца левосимендана и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца левосимендана:

— фактор асимметрии пика (A_S) левосимендана должен быть не более 2,0;

— относительное стандартное отклонение площади пика левосимендана должно быть не более 2,0 % (6 введений).

Содержание левосимендана C₁₄H₁₂N₆O в субстанции в процентах в пересчёте на сухое вещество (X) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика левосимендана на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора стандартного образца левосимендана;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца левосимендана, мг;
	W	–	потеря в массе при высушивании, %;
	P	–	содержание левосимендана в фармакопейном стандартном образце левосимендана, %.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке.

 

*Перед проведением испытания должна быть проверена разделительная способность хроматографической системы.