ФС.2.3.0004. Лизоцима гидрохлорид

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Лизоцима гидрохлорид	ФС.2.3.0004
Лизоцим
Lysozymi hydrochloridum	Вводится впервые

 

C616H963N193O182S10·nHCl	М.м. 14305,0 (основание)
[12650-88-3]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Пептидогликан N-ацетилмурамоилгидролаза из яичного белка, гидрохлорид.

Лизоцима гидрохлорид является основным пептидом, получаемым из белка куриного яйца, и обладает способностью гидролизовать мукополисахариды. Для получения исходного сырья используют животных, у которых отсутствуют опасные для человека заболевания вирусной, бактериальной и микоплазменной этиологии.

Cодержит не менее 0,9 мг/мг (по активности) лизоцима C₆₁₆H₉₆₃N₁₉₃O₁₈₂S₁₀ в пересчёте на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

*Гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте 95 %.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Раствор уксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 5,78 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор натрия ацетата. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,2 г натрия ацетата безводного, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Буферный раствор. В мерной колбе вместимостью 1000 мл смешивают 176 мл раствора уксусной кислоты и 824 мл раствора натрия ацетата, доводят значение рН раствором уксусной кислоты или раствором натрия ацетата до 5,40.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора буферным раствором до метки.

Раствор стандартного образца лизоцима. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца лизоцима, растворяют в буферном растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём буферным раствором до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 220 до 400 нм должен соответствовать спектру раствора стандартного образца лизоцима.

2. Качественная реакция

Раствор нингидрина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г нингидрина, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл буферного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора нингидрина и нагревают на водяной бане в течение 10 мин; должно появиться сине-фиолетовое окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 0,15 г субстанции в 10 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции(мутности) жидкостей»). При необходимости доводят значение рН хлористоводородной кислотой разведённой 8,3 % до 3,00.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 3,0 до 5,0 (1,5 % раствор, ОФС«Ионометрия», метод 3).

Азот. От 16,8 до 18,6 %, в пересчёте на сухое вещество (ОФС «Определение азота в органических соединениях методом Кьельдаля», метод 2). Для определения используют 15 мг (точная навеска) субстанции.

Потеря в массе при высушивании. Не более 8,0 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Высушивают до постоянной массы 0,1 г (точная навеска) субстанции при температуре 105 °С в течение 2 часов.

Сульфатная зола. Не более 2,0 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза – 5 мг лизоцима гидрохлорида в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения – 48 ч.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Раствор калия дигидрофосфата. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 9,08 г калия дигидрофосфата, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор динатрия гидрофосфата. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 2,365 г динатрия гидрофосфата безводного, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Буферный раствор. В мерной колбе вместимостью 1000 мл смешивают 800 мл раствора калия дигидрофосфата и 200 мл раствора динатрия гидрофосфата, при необходимости доводят значение рН раствором калия дигидрофосфата или раствором динатрия гидрофосфата до 6,2.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) в пересчёте на сухое вещество субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора буферным раствором до метки. Раствор используют свежеприготовленным и хранят при температуре от 2 до 8 °С.

Раствор стандартного образца лизоцима. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) в пересчёте на сухое вещество фармакопейного стандартного образца лизоцима, растворяют в буферном растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют свежеприготовленным и хранят при температуре от 2 до 8 °С.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца лизоцима и доводят объём раствора буферным раствором до метки. Раствор используют свежеприготовленным и хранят при температуре от 2 до 8 °С.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл раствора стандартного образца лизоцима и доводят объём раствора буферным раствором до метки. Раствор используют свежеприготовленным и хранят при температуре от 2 до 8 °С.

Раствор субстрата. Готовят раствор лиофилизата клеток Micrococcus lysodeikticus в буферном растворе с концентрацией около 0,3 мг/мл.

В три флакона с завинчивающимися крышками добавляют по 4,0 мл раствора субстрата, предварительно нагретого при 36±1 °С в течение 10 мин, с интервалом в одну минуту прибавляют 0,1 мл испытуемого раствора в первый флакон, 0,1 мл раствора сравнения А во второй флакон и 0,1 мл раствора сравнения Б в третий флакон. Смеси выдерживают в течение ровно 12 мин на водяной бане при 36±1 °С, прибавляют в первый флакон 0,5 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 М и перемешивают. С интервалом в одну минуту прибавляют по 0,5 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 М во второй и в третий флакон.

Измеряют оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 640 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения воду.

Содержание (по активности) лизоцима C₆₁₆H₉₆₃N₁₉₃O₁₈₂S₁₀ в субстанции в пересчёте на сухое вещество в мг/мг (Х), вычисляют по формуле:

где	А1	–	оптическая плотность испытуемого раствора;
	А0А	–	оптическая плотность раствора сравнения А;
	А0Б	–	оптическая плотность раствора сравнения Б;
	а1	–	навеска субстанции в пересчёте на сухое вещество, мг;
	a0	–	навеска фармакопейного стандартного образца лизоцима в пересчёте на сухое вещество, мг;
	Р	–	активность фармакопейного стандартного образца лизоцима, мг/мг.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке.

 

*Приводится для информации.