ФС.2.1.0559. Рибофлавин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Рибофлавин ФС.2.1.0559
Рибофлавин
Riboflavinum Взамен ФС 42-2954-93

 

C17H20N4O6

М.м. 376,36

[83-88-5]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

7,8-Диметил-10-[(2S,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]бензо[g]птеридин-2,4(3H,10H)-дион.

Субстанция представляет собой продукт ферментации.

Содержит не менее 97,0 % и не более 103,0 % рибофлавина C17H20N4O6 в пересчёте на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Жёлтый или оранжево-жёлтый кристаллический порошок.

*Проявляет полиморфизм. Растворы рибофлавина неустойчивы на свету, особенно в присутствии щелочей.

Растворимость. Очень мало растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96 %.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. Смешивают равные объёмы испытуемого раствора, полученного в испытании «Количественное определение», и воды.

Спектр поглощения испытуемого раствора должен иметь максимумы при 223 нм, 267 нм, 373 нм и 444 нм. Отношение значений оптических плотностей A373/A267 должно быть от 0,31 до 0,33. Отношение значений оптических плотностей A444/A267 должно быть от 0,36 до 0,39.

2. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля (2-10 мкм).

Подвижная фаза (ПФ). Вода.

Испытуемый раствор. К 25 мг субстанции прибавляют 10 мл воды, встряхивают в течение 5 мин и фильтруют.

Раствор стандартного образца рибофлавина. К 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца рибофлавина прибавляют 10 мл воды, встряхивают в течение 5 мин и фильтруют.

На линию старта пластинки наносят:

— 1 точка: 2 мкл метиленхлорида и затем 2 мкл испытуемого раствора;

— 2 точка: 2 мкл метиленхлорида и затем 2 мкл раствора стандартного образца рибофлавина.

После каждого последовательного нанесения в точках 1 и 2 пластинку подсушивают в токе холодного воздуха, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат в потоке холодного воздуха до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и цвету флуоресценции должна соответствовать зоне адсорбции рибофлавина на хроматограмме раствора стандартного образца рибофлавина.

3. Качественная реакция. Растворяют 1 мг субстанции в 100 мл воды. В проходящем свете раствор должен иметь бледно-зеленовато-жёлтый цвет, в отражённом свете — интенсивную желтовато-зелёную флуоресценцию, которая должна исчезать при добавлении минеральных кислот или щелочей.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От –115,0 до –135,0 в пересчёте на сухое вещество (ОФС «Оптическое вращение»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 0,05 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют в течение 30 мин.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют сразу после приготовления и защищают от света.

Подвижная фаза А (ПФА). Фосфорная кислота концентрированная—вода 1:1000.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Натрия ацетата раствор 0,1 М.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,12 г субстанции, растворяют в 10 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, при необходимости обрабатывая ультразвуком, и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в 1 мл натрия гидроксида раствора 0,5 М, выдерживают в дневном свете в течение 1,5 ч, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведённой 30 % и доводят объём раствора водой до метки (содержит примеси A и B).

Раствор для идентификации пиков. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца рибофлавина для идентификации пиков, содержащего примеси С и D, растворяют в 1 мл смеси ПФБ—ПФА 1:9, при необходимости обрабатывая ультразвуком.

Примечание

Примесь А: 7,8,10-триметилбензо[g]птеридин-2,4(3H,10H)-дион [1088-56-8].

Примесь В: 7,8-диметилбензо[g]птеридин-2,4(1H,3H)-дион [1086-80-2].

Примесь С: 6,7-диметил-8-[(2S,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]птеридин-2,4(3H,8H)-дион [5118-16-1].

Примесь D: 8-(гидроксиметил)-7-метил-10-[(2S,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]бензо[g]птеридин-2,4(3H,10H)-дион [52134-62-0].

Хроматографические условия

Колонка 250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки 25 °С;
Скорость потока 1,0 мл/мин;
Детектор спектрофотометрический, 267 нм;
Объём пробы 10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин

ПФА, %

ПФБ, %

0–5

90

10

5–20

90 → 80

10 → 20

20–25

80

20

25–35

80 → 50

20 → 50

35–45

50

50

Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Рибофлавин – 1 (около 16 мин); примесь С – около 0,2; примесь D – около 0,5; примесь А – около 1,4; примесь В – около 1,9.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей С и D используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для идентификации пиков и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу рибофлавина для идентификации пиков.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси А и примеси В должно быть не менее 5.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь А – 0,7; примесь В и D – 1,4, примесь С – 2,3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика примеси А не должна превышать 0,25 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,025 %);

— площадь пика каждой из примесей B, С и D не должна превышать двукратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать пятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

Не учитывают пики, кроме пика примеси А, площадь которых составляет менее 0,5-площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,5 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3А или 3Б), в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола» с использованием эталонного раствора 1.

**Бактериальные эндотоксины. Не более 7,1 ЕЭ на 1 мг рибофлавина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Все растворы защищают от света.

Раствор натрия ацетата. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,4 г натрия ацетата тригидрата, растворяют воде и доводят объём раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу из тёмного стекла вместимостью 500 мл помещают 65 мг (точная навеска) субстанции, суспендируют с 5 мл воды до полного смачивания, прибавляют 5 мл натрия гидроксида раствора 8,5 %, перемешивают до полного растворения, тотчас прибавляют 100 мл воды, 2,5 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу из тёмного стекла вместимостью 200 мл помещают 20,0 мл полученного раствора, прибавляют 3,5 мл раствора натрия ацетата и доводят объём раствора водой до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 444 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения воду.

Содержание рибофлавина C17H20N4O6 в субстанции в пересчёте на сухое вещество в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где

A

оптическая плотность испытуемого раствора;

328

удельный показатель поглощения рибофлавина, ();

навеска субстанции, г;

потеря в массе при высушивании, %.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.

 

*Приводится для информации.

**Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Добавить комментарий

Мы используем cookie-файлы для наилучшего представления нашего сайта. Продолжая использовать этот сайт, вы соглашаетесь с использованием cookie-файлов.
Принять
Политика конфиденциальности