ФС.2.1.0600. Кладрибин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Кладрибин	ФС.2.1.0600
Кладрибин
Cladribinum	Вводится впервые

 

C10H12ClN5O3	М.м. 285,69
[4291-63-8]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

9-(2-Деокси-β-D-эритро-пентофуранозил)- 2-хлор-9H-пурин-6-амин.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 102,0 % кладрибина C₁₀H₁₂ClN₅O₃ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

*Проявляет полиморфизм.

Растворимость. Растворим в диметилсульфоксиде, мало растворим в воде и метаноле, практически нерастворим в ацетонитриле.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см−1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца кладрибина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объёмах метанола, выпаривают на водяной бане досуха при температуре 45 °С, высушивают при 105 °С в течение 2 ч и записывают спектры сухих остатков.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От –21,0 до –27,0 в пересчёте на безводное вещество (1 % раствор субстанции в диметилсульфоксиде, ОФС «Оптическое вращение»).

**Прозрачность раствора. Растворяют 0,15 г субстанции в 50 мл воды, обрабатывают ультразвуком до растворения. Раствор должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

**Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Родственные примеси. Примеси А, B, C, D. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Вода.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Подвижная фаза В (ПФВ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 800 мл воды, прибавляют 30 мл фосфорной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до метки.

Растворитель. Ацетонитрил—вода 10:90.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения А и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси C, растворяют в 10 мл раствора сравнения А и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для идентификации примесей. Растворяют 3 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца для идентификации пиков (содержит примеси A, B, C и D) в 2,0 мл растворителя.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения Б и доводят объём раствора растворителем до метки.

Примечание

Примесь А: 9-(2-деокси-β-D-эритро-пентофуранозил)-9H-пурин-2,6-диамин [4546-70-7].

Примесь B: 9-(2-деокси-β-D-эритро-пентофуранозил)-2-метокси-9H-пурин-6-амин [24757-70-8].

Примесь C: 2-хлор-7H-пурин-6-амин [1839-18-5].

Примесь D: 2-хлор-9-(2-деокси-α- D-эритро-пентофуранозил)-9H-пурин-6-амин [5542-92-7].

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октилсилильный, деактивированный по отношению к основаниям для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	0,8 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 252 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %	ПФВ, %
0–10	80 → 70	10 → 20	10
10–25	70 → 20	20 → 70	10
25–30	20	70	10

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для идентификации примесей, раствор сравнения Б и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Кладрибин – 1 (около 10 мин); примесь A – около 0,33; примесь B – около 0,44; примесь C – около 0,73; примесь D – около 0,92.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, C и D используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора сравнения Б и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу для идентификации примесей A, B, C и D.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси С и кладрибина должно быть не менее 4,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания примесей B и C, площади пиков этих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B – 1,7; примесь С – 0,8.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика каждой из примесей A и C не должна более чем в три раза превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,3 %);

— площадь пика каждой из примесей B и D не должна более чем в два раза превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,2 %);

— площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,1 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 1,0 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика кладрибина на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05 %).

Примесь Е. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Аммиака раствор концентрированный 25 %—спирт 96 %—этилацетат 20:40:40.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 40 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в диметилформамиде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси Е. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси Е (2-деокси-D-эритро-пентофураноза [1831121-84-6]), растворяют в 10 мл диметилформамида и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора диметилформамидом до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси Е, растворяют в диметилформамиде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. Смешивают полученный раствор и испытуемый раствор 9:1.

Реактив для детектирования. Растворяют 0,5 г тимола в 100 мл смеси растворителей спирт 96 %—серная кислота концентрированная 95:5.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора (100 мкг), раствора стандартного образца примеси Е (0,3 мкг) и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Пластинку с нанесёнными пробами высушивают в потоке тёплого воздуха до удаления следов растворителей, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат на воздухе, затем нагревают при температуре 45 °С в течение 10 мин, опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °С в течение 20 мин или до появления зон адсорбции и просматривают в УФ – свете при длине волны 254 нм.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы чётко видны две зоны адсорбции.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции, находящаяся на уровне зоны адсорбции примеси E, по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца примеси Е (не более 0,3 %).

Вода. Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

**Бактериальные эндотоксины. Не более 41,67 ЕЭ на 1 мг кладрибина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытаний готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 0,5 мг/мл.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси со следующими изменениями.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца кладрибина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца кладрибина, растворяют в растворителе и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца кладрибина и испытуемый раствор.

Содержание кладрибина C₁₀H₁₂ClN₅O₃ в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	—	площадь пика кладрибина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	—	площадь пика кладрибина на хроматограмме раствора стандартного образца кладрибина;
	a1	—	навеска субстанции, мг;
	a0	—	навеска фармакопейного стандартного образца кладрибина , мг;
	W	—	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.
	P	—	содержание основного вещества в фармакопейном стандартном образце кладрибина, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте при температуре от 2 до 8 °С.

 

*Приводится для информации.

**Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.