ФС.2.1.0656. Гозерелина ацетат

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Гозерелина ацетат	ФС.2.1.0656
Гозерелин
Goserelini acetas	Вводится впервые

 

C59H84N18O14·xC2H4O2	М.м. 1269,4 (основание)
[145781-92-6]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

2-(5-Оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O—трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамида ацетат.

Cодержит не менее 94,5 % и не более 103,0 % гозерелина C₅₉H₈₄N₁₈O₁₄ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

Растворимость. Легко растворим в уксусной кислоте ледяной, легко растворим или растворим в воде, растворим в натрия гидроксида растворе 0,1 М.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика гозерелина на хроматограмме раствора фармакопейного стандартного образца гозерелина (раздел «Количественное определение»).

2. Аминокислотный состав. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ» (гидролиз по методу 1 в жидкой фазе, анализ по методу 1). Относительное содержание каждой аминокислоты рассчитывают в мольных долях, принимая за единицу одну шестую суммарного мольного содержания глутаминовой кислоты, гистидина, тирозина, лейцина, аргинина, пролина и серина по формуле:

где	ni	–	количество молей соответствующей аминокислоты, мкмоль;
	∑n(Glu, His, Tyr, Leu, Arg, Pro, Ser)	–	сумма мольного содержания глутаминовой кислоты, гистидина, тирозина, лейцина, аргинина, пролина, серина, мкмоль.

Относительное содержание аминокислот должно быть в следующих пределах: глутаминовая кислота от 0,9 до 1,1; гистидин от 0,9 до 1,1; тирозин от 0,9 до 1,1; лейцин от 0,9 до 1,1; аргинин от 0,9 до 1,1; пролин от 0,9 до 1,1; серин от 1,6 до 2,2. Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах, за исключением триптофана.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От –52 до –56 в пересчёте на безводное, свободное от уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество (0,2 % раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,05 г субстанции в 25 мл воды, свободной от углерода диоксида, должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности)жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

рН. От 4,0 до 6,5 (раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

*Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФ). Трифторуксусная кислота—ацетонитрил—вода 0,5:200:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца примеси А в воде с концентрацией 0,1 мг/мл. К 1,0 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл раствора сравнения Б.

Раствор для идентификации пиков. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца гозерелина смеси для валидации растворяют в 1,0 мл воды.

Примечание

Примесь А ([4-D-серин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-D-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O—трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид [1926163-39-4].

Примесь В ([6-O—трет-бутил-L-серин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь С ([9-D-пролин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O—трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-D-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь D (де-9-L-пролин-гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O—трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил)гидразинкарбоксамид.

Примесь E (гозерелин-(1-8)-пептидил-L-пролингидразид): 5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O—трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролингидразид.

Примесь F ([5-D-тирозин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь G ([2-D-гистидин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-D-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь Н ([1-(5-оксо-D-пролин)]гозерелин): 2-(5-оксо-D-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь I (эндо-8a,8b-ди-L-пролин-гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил-L-пролил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь J (эндо-8a-L-пролин-гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь К ([4-O-ацетил-L-серин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-O-ацетил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-L-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Примесь L ([7-D-лейцин]гозерелин): 2-(5-оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-D-тирозил-O—трет-бутил-L-серил-D-лейцил-L-аргинил-L-пролил)гидразинкарбоксамид.

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм, кремнийорганический полимер, аморфный, октадецилсилильный с полярными мостиками, эндкепированный для хроматографии, 3,5 мкм, размер пор 12,5 нм;
Температура колонки	50-55 °С;
Скорость потока	0,7-1,2 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объём пробы	10 мкл;
Время хроматографирования	90 мин.

Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения А и испытуемый раствор.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков используют хроматограмму раствора для идентификации пиков и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу гозерелина смеси для валидации.

Относительное время удерживания соединений. Гозерелин – 1 (от 40 до 50 мин); примесь А – около 0,67; примесь С – около 0,78; примесь В – около 0,79; примесь D – около 0,85; примесь Е – около 0,89; примесь F – около 0,92; примесь G – около 0,94; примесь H – около 0,98; примесь I – около 1,43; примесь J – около 1,53; примесь K – около 1,67; примесь L – около 1,77.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

— разрешение (R_S) между пиками примеси А и гозерелина должно быть не менее 7,0;

— фактор асимметрии пика (A_S) гозерелина должен быть от 0,8 до 2,5;

— фактор асимметрии пика (A_S) примеси А должен быть от 0,8 до 2,5.

На хроматограмме раствора для идентификации пиков расположение пиков должно быть аналогично хроматограмме, прилагаемой к фармакопейному стандартному образцу гозерелина смеси для валидации; 2 пика, расположенные до пика основного вещества (соответствуют примесям E и G), должны быть хорошо различимы.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

— площадь пика примеси Е не должна превышать площадь пика гозерелина на хроматограмме раствора сравнения А (не более 1,0 %);

— площадь пика любой примеси не должна превышать 0,5 площади пика гозерелина на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,5 %);

— сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать 2,5 площади пика гозерелина на хроматограмме раствора сравнения А (не более 2,5 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,05 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (менее 0,05 %).

Вода. Не более 10,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 50 мг (точная навеска) субстанции.

Уксусная кислота. От 4,5 до 15,0 %. (ОФС «Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси ПФБ—ПФА 5:95 и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Бактериальные эндотоксины. Не более 16,0 ЕЭ на 1 мг гозерелина ацетата (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца гозерелина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца гозерелина в воде с концентрацией гозерелина около 1,0 мг/мл.

Хроматографические условия

Время хроматографирования

60 мин

Хроматографируют раствор фармакопейного стандартного образца гозерелина и испытуемый раствор.

Содержание гозерелина C₅₉H₈₄N₁₈O₁₄ в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика гозерелина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика гозерелина на хроматограмме раствора фармакопейного стандартного образца гозерелина;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца гозерелина, мг;
	P	–	содержание гозерелина в фармакопейном стандартном образце гозерелина, %;
	W	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
	A	–	содержание уксусной кислоты в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте при температуре от 2 до 8 °С.

 

*При необходимости следует отрегулировать скорость потока ПФ; если регулировка скорости потока не приводит к указанному времени удерживания основного пика, рекомендуется изменить долю ацетонитрила в ПФ, чтобы получить указанное время удерживания для гозерелина.