ФС.2.1.0691. Окситоцин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 г. № 120

Дата введения в действие: c 13.03.2024 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Окситоцин	ФС.2.1.0691
Окситоцин
Oxytocinum	Взамен ВФС 42-2059-96

 

C43H66N12O12S2	М.м. 1007,2
[50-56-6]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

S3.1,S3.6-Цикло(L-цистеинил-L-тирозил-L-изолейцил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-лейцилглицинамид).

Содержит не менее 93,0 % и не более 102,0 % окситоцина C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

*Существует в форме окситоцина ацетата.

Биологическая активность окситоцина соответствует 600 МЕ на 1 мг окситоцина C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

*Гигроскопичен.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, легко растворим в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М.

*Растворяется в разбавленном растворе уксусной кислоты.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Проводят определения 1 и 2 или 1 и 3.

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика окситоцина на хроматограмме раствора стандартного образца окситоцина (раздел «Количественное определение»).

2. Аминокислотный состав. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ», гидролиз по методу 1, анализ по методу 1. Относительное содержание каждой аминокислоты рассчитывают в мольных долях, принимая за единицу одну шестую суммарного мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, изолейцина и лейцина по формуле:

где		–	количество молей соответствующей аминокислоты, мкмоль;
		–	сумма мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, изолейцина и лейцина, мкмоль.

Относительное содержание аминокислот должно быть в следующих пределах: аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, пролин, глицин, лейцин и изолейцин – от 0,90 до 1,10; тирозин – от 0,7 до 1,05; полуцистин – от 1,4 до 2,1. Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах.

3. 1H-ЯМР-спектроскопия (ОФС «Спектроскопия ядерного магнитного резонанса»).

Растворитель. Дейтерия оксид, содержащий 0,02 мг/мл дейтерированного триметилсилилпропионата натрия (ТСП), доводят pH дейтерированной уксусной кислотой до значений 5–6. Хранят в контейнере из полиэтилена высокой плотности.

Испытуемый раствор. Готовят раствор субстанции в растворителе с концентрацией окситоцина около 10 мг/мл.

Раствор стандартного образца окситоцина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца окситоцина для ЯМР идентификации в растворителе с концентрацией окситоцина около 10 мг/мл.

Оборудование. Импульсный ЯМР-спектрометр с рабочей частотой на протонах не менее 300 МГц.

Параметры регистрации 1H ЯМР спектров

Ширина спектра	от 0 до 9 м.д.
Температура образца	22–27 °С;
Число сканирований	не менее 32.

Примечание – Спектры испытуемого раствора и раствора сравнения должны записываться без вращения образца и при одинаковой температуре.

Анализ 1H ЯМР спектров. Спектр испытуемого раствора должен соответствовать спектру раствора стандартного образца окситоцина после нормализации обоих спектров с целью уравнивания их по интенсивности. Допускается наличие сигналов протонов уксусной кислоты при 1,9 м.д., воды при 4,9 м.д. и сигналов остаточных растворителей. Допускается различная интенсивность сигналов уксусной кислоты.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 10 мг субстанции в 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,01 М должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 3,0 до 6,0 (2,0 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФА). Растворяют 15,6 г натрия дигидрофосфата дигидрата в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Подвижная фаза (ПФБ). Ацетонитрил—вода 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФА и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси F. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца примеси F окситоцина растворяют в 1,0 мл ПФА.

Раствор для идентификации. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца окситоцина для идентификации, содержащий примеси В, D, E и I, растворяют в 1,0 мл ПФА.

Примечание

Примесь В: S3.1,S3.6′:S3.6,S3.1′-цикло[бис(L-цистеинил-L-тирозил-L-изолейцил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-лейцилглицинамид)] [20054-93-7].

Примесь D: [3-лейцин]окситоцин [4294-11-5].

Примесь Е: N2.1—ацетилокситоцин [10551-48-1].

Примесь F: [5-(3-цианоаланин)]окситоцин [87590-89-4].

Примесь I: [5-аспарагиновая кислота]окситоцин [65907-78-0].

Хроматографические условия

Колонка	125 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный для хроматографии, 3 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объём пробы	50 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–30	70 → 40	30 → 60
30–30,1	40 → 70	60 → 30
30,1–45	70	30

Хроматографируют раствор для идентификации, раствор стандартного образца примеси F и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Окситоцин – 1 (около 10 мин); примесь I – около 0,9; примесь D – около 0,95; примеси Е и F – около 1,4; примесь В – около 1,7.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей В, D, E и I используют хроматограмму раствора для идентификации. Для идентификации пика примеси F используют хроматограмму раствора стандартного образца примеси F и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу примеси F.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для идентификации отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси D и окситоцина должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. Содержание любой примеси в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

— примесь В – не более 1,0 %;

— примесь I – не более 1,0 %;

— сумма примесей Е и F – не более 1,5 %;

— любая другая примесь – не более 1,0 %;

— сумма примесей – не более 5,0 %.

Не учитывают пики менее 0,1 %.

Вода. Не более 5,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 50 мг (точная навеска) субстанции.

Уксусная кислота. От 6,0 % до 10,0 %. (ОФС «Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 15 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси ПФБ и ПФА в соотношении 5:95 по объёму и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

**Бактериальные эндотоксины. Не более 300 ЕЭ на 1 мг окситоцина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца окситоцина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца окситоцина в ПФА с концентрацией окситоцина в растворе около 0,25 мг/мл.

Хроматографические условия

Объём пробы

25 мкл.

Хроматографируют раствор стандартного образца окситоцина и испытуемый раствор.

Содержание окситоцина C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂ в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество в процентах (Х), вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика окситоцина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика окситоцина на хроматограмме раствора стандартного образца окситоцина;
	1	–	концентрация окситоцина в испытуемом растворе, мг/мл;
		–	концентрация окситоцина в растворе стандартного образца окситоцина, мг/мл;
	P	–	содержание окситоцина в фармакопейном стандартном образце окситоцина, %;
	А	–	содержание уксусной кислоты в субстанции, %;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищённом от света месте, при температуре от 2 до 8 °C.

 

*Приводится для информации.

**Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.