ФС.2.1.0485. Тобрамицин

утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 г. N 377

Дата введения в действие: c 01.09.2023 г.

Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания

 

 

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Тобрамицин	ФС.2.1.0485
Тобрамицин
Tobramycinum	Взамен ВФС 42-2011-90

 

C18H37N5O9	М.м. 467,51
[32986-56-4]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

O-3-Амино-3-дезокси-α-D-глюкопиранозил-(1®6)-O-[2,6-диамино-2,3,6-тридезокси-α-D-рибо-гексопиранозил-(1®4)]-2-дезокси-D-стрептамин.

Тобрамицин получают с использованием штаммов Streptomyces tenebrarius или другим способом.

Cодержит не менее 900 мкг на 1 мг тобрамицина C₁₈H₃₇N₅O₉ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

*Гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в хлороформе и эфире.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика тобрамицина на хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина (раздел «Количественное определение»).

2. ТСХ. (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Растворы используют свежеприготовленными.

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Хлороформ—аммиака раствор концентрированный 25 %—метанол 25:30:60.

Реактив для детектирования. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 г нингидрина, растворяют в смеси пиридин—бутанол 1:100 и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 60 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца тобрамицина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 60 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца тобрамицин, растворяют в 5 мл воды и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. Смешивают равные объёмы испытуемого раствора и раствора стандартного образца тобрамицина.

На линию старта пластинки наносят по 3 мкл испытуемого раствора (18 мкг), раствора стандартного образца тобрамицина (18 мкг) и стандартного раствора (18 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами высушивают на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °С в течение 15 мин, опрыскивают реактивом для детектирования и просматривают при дневном свете.

Результат. Основные зоны адсорбции на хроматограмме испытуемого и стандартного раствора по положению, интенсивности окраски и величине должны соответствовать основным зонам адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина.

3. Качественная реакция. Растворяют 5,0 мг субстанции в 5 мл воды, прибавляют 5 мл раствора нингидрина, нагревают на водяной бане в течение 3 мин; должно появиться фиолетово-синее окрашивание.

Раствор нингидрина. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,0 г нингидрина, растворяют в спирте 96 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +138 до +148 в пересчёте на безводное вещество (4 % раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 50 мг субстанции в 1 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y₆ (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

рН раствора. От 9,0 до 11,0 (10 % раствор в воде, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Растворы используют свежеприготовленными.

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Раствор натрия хлорида. Растворяют 29,2 г натрия хлорида в 100 мл воды.

Подвижная фаза (ПФ). Вода—спирт 96 %—раствор натрия хлорида 20:30:50.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в 7 мл воды, доводят значение рН до 5,5 серной кислоты раствором 0,5 М и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Реактив для детектирования (А). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мл натрия гипохлорита раствора концентрированного и доводят объём раствора водой до метки.

Реактив для детектирования (Б). Растворяют 1,1 г калия йодида в 60 мл воды, кипятят в течение 15 мин, медленно прибавляют суспензию 1,5 г крахмала растворимого в 10 мл воды, прибавляют 25 мл воды и кипятят в течение 10 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём раствора водой до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг) и раствора сравнения (0,05 мкг). Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат в потоке горячего воздуха до удаления следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °С в течение 10 мин. Горячую пластинку обрабатывают реактивом для детектирования (А), сушат в потоке холодного воздуха, пока при добавлении капли реактива для детектирования (Б) зона адсорбции, расположенная ниже основной зоны адсорбции, не приобретёт бледно-голубое окрашивание. Затем обрабатывают пластинку реактивом для детектирования (Б) и просматривают в дневном свете. Зона адсорбции, расположенная ниже основной зоны адсорбции, из бледно-голубого окрашивания переходит в голубовато-фиолетовое.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции любой примеси по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции тобрамицина на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0 %).

Вода. Не более 8,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,3 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,003 %. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС«Тяжёлые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 0,33 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1, или методом 12.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

**Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза – 0,5 мг тобрамицина в 0,5 мл натрия хлорида раствора 0,9 % для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения – 48 ч.

**Бактериальные эндотоксины. Не более 2,0 ЕЭ на 1 мг тобрамицина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

**Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 2000 мл помещают 2,0 г трис(гидроксиметил)аминометана, растворяют в 800 мл воды, прибавляют 20 мл серной кислоты раствора 0,5 М, доводят объём раствора ацетонитрилом до метки, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через фильтр с размером пор 0,2 мкм.

Раствор фтординитробензола. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 г фтординитробензола, растворяют в спирте 96 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор трис(гидроксиметил)аминометана. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,75 г трис(гидроксиметил)аминометана, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 40,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора диметилсульфоксидом до метки. Срок годности раствора – 4 ч.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 67 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца тобрамицина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 11 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца тобрамицина, прибавляют 0,2 мл серной кислоты раствора 0,5 М, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Дериватизация растворов. В отдельные мерные колбы вместимостью 50 мл помещают по 4,0 мл испытуемого раствора, раствора стандартного образца тобрамицина и воды, прибавляют по 10,0 мл раствора фтординитробензола, по 10,0 мл раствора трис(гидроксиметил)аминометана, перемешивают, герметично закрывают, нагревают на водяной бане при температуре 60 °С в течение 50 мин, вынимают из водяной бани, оставляют на 10 мин, прибавляют ацетонитрил, почти доводя объём растворов до метки, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём растворов ацетонитрилом до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг нафтолбензеина, растворяют в ацетонитриле и доводят объём раствора ацетонитрилом до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора дериватизированным раствором стандартного образца тобрамицина до метки. Раствор используют сразу после приготовления.

Хроматографические условия

Колонка	300 × 3,9 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	1,2 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 365 нм;
Объём пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	2,5-кратное от времени удерживания пика тобрамицина.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы и дериватизированные растворы.

Относительные времена удерживания соединений. Тобрамицин – 1 (около 9 мин); нафтолбензеин – около 0,6.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками нафтолбензеина и тобрамицина должно быть не менее 4,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина относительное стандартное отклонение площади пика тобрамицина должно быть не более 2,0 % (6 определений).

Содержание тобрамицина C₁₈H₃₇N₅O₉ в субстанции в мкг/мг в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (X) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика тобрамицина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика тобрамицина на хроматограмме раствора стандартного образца тобрамицина;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца тобрамицина, мкг;
	P	–	содержание тобрамицина в фармакопейном стандартном образце тобрамицина, мкг/мг;
	W	–	содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке.

 

*Приводится для информации.

**Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.